土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC)試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
S-β-GC能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團之間的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖維素分解酶系中重要組成成分之一,在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。
測定原理:
S-β-GC能夠催化對-硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。
自備用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:甲苯5mL×1瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入10mL蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體15mL×1瓶,4℃保存;
樣品處理:
新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干,過30~50目篩。
測定步驟:
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至400nm,蒸餾水調零。
2、 加樣表
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風干土樣(g) | 0.02 | 0.02 |
試劑一(μL) | 10 | 10 |
室溫振蕩混勻15min | 90℃振蕩混勻15min | |
試劑二(μL) | 130 | |
蒸餾水 | 130 | |
試劑三(μL) | 160 | 160 |
混勻, 37℃振蕩反應1h后,90℃水浴5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻,
10000g 25℃離心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列試劑)
上清液(μL) | 70 | 70 |
試劑四(μL) | 130 | 130 |
充分混勻,室溫靜置2min后, 400nm處測定吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。
S-β-GC活力計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0032x -0.0027;x為標準品濃度(μmol/L),y為吸光值。
單位的定義:每天每g土樣中產生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
S-β-GC活力(μmol/d/g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V反總÷W÷T =112.5×(ΔA+0.0027)
T:反應時間,1h=1/24d; V反總:反應體系總體積:3×10-4 L;W:樣本質量,0.02g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.0027;x為標準品濃度(μmol/L),y為吸光值。
單位的定義:每天每g土樣中產生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
S-β-GC活力(μmol/d/g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0016×V反總÷W÷T =225×(ΔA+0.0027)
T:反應時間,1h=1/24d; V反總:反應體系總體積:3×10-4 L;W:樣本質量,0.02g。
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