土壤銨態氮試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注 意 :正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
土壤中的銨態氮可被土壤膠體吸附,呈交換性銨狀態氮肥,也可溶解在土壤溶液中,能直接被植物吸收利用,屬于速效性氮素。
測定原理:
土壤中的銨態氮在強堿性介質中與次氯酸鹽和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚藍,在 625nm
處有特征吸收峰,吸光值與銨態氮含量成正比。
自備實驗用品及儀器:
天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、振蕩儀。
試劑組成和配制:
提取液:液體 110mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×2 瓶,4℃避光保存。臨用前根據用量每瓶加 4mL 雙蒸水溶解,現配現用。
試劑二:液體 8mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體 2mL×1 瓶,4℃保存。
樣本處理:
按照土壤質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 新鮮土樣,加入
1mL 提取液),振蕩提取 1h,10000g ,25℃離心 10min,取上清液待測。
測定操作表:
1、 分光光度計/酶標儀預熱 30min,調節波長至 625nm,蒸餾水調零。
2、 操作表
空白管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 20 | |
提取液(μL) | 20 | |
試劑一(μL) | 80 | 80 |
試劑二(μL) | 80 | 80 |
充分混勻,25℃靜置 1h | ||
試劑三(μL) | 20 | 20 |
充分混勻,于微量石英比色皿/96 孔板中,蒸餾水調零,測定 625nm 處吸光值 A,分別 記為 A 空白管和 A 測定管,△A=A 測定管-A 空白管 |
計算公式
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y =0.1522x-0.0009,R2= 0.9993
NH +—N 含量(mg/kg 鮮重)=(△A+0.0009)÷ 0.1522÷W
= 6.57×(△A+0.0009)÷W
W :樣本質量,g
b.用 96 孔板測定的
計算公式如下 :
標準曲線:y = 0.0761x-0.0009,R2= 0.9993
NH +—N 含量(mg/kg 鮮重)=(△A+0.0009)÷ 0.0761÷W
= 13.14×(△A+0.0009)÷W
W:樣本質量,g
注意事項 :
1 .試劑一必須避光低溫保存,配制好的試劑一 4℃保存不能超過 20 天。
2. 浸提液最好在當日完成測定,如果不能完成,可冷凍保存,但不能超過兩天。
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