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土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidase,S-PPO)試劑盒說明書

閱讀:289      發布時間:2023-09-21
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土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidase,S-PPO)試劑盒說明書

                                          微量法 100管/96樣

 

注   意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:                           

S-PPO主要來源于土壤微生物、植物根系分泌物及動植物殘體分解釋放,催化土壤中芳香族化合物氧化成醌,醌與土壤中蛋白質、氨基酸、糖類、礦物等物質反應生成有機質和色素,完成土壤芳香族化合物循環,用于土壤環境修復。

 

測定原理:

S-PPO能夠催化鄰苯三酚產生有色物質,后者在430nm有特征光吸收。

 

自備用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、yi醚50mL(不允許快遞)和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:粉劑×2瓶,4℃保存;臨用前取一瓶,加入7mL蒸餾水充分溶解后待用;用不完的試劑4℃保存一周。

試劑二:液體6mL×1瓶,4℃保存;

試劑三:yi醚50mL×1瓶,4℃保存;(自備)

 

樣品處理:

新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干,過30~50目篩。

 

測定步驟:

 

1、   分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至430nm,蒸餾水調零。

2、  加樣表

試劑名稱

測定管

風干土樣(g)

0.02

試劑一(μL)

120

振蕩混勻,30℃恒溫培養1 h

試劑二(μL)

50

試劑三(μL)

430

振蕩數次,室溫靜置30min,取200μL上層液于430nm處測定吸光值A。

(注意:1、因yi醚粘度小,易掉液,吸取前需先將槍頭在上層液里潤洗2~3次,再轉移測定;2、yi醚易揮發,轉移到96孔板后立即測定,最好一個一個測定)。

 

S-PPO活力計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 8.97x -0.003;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值A。

單位的定義:每天每g土樣中產生1mg 紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。

 

S-PPO活力(mg /d/g 土樣)=(A+0.003) ÷8.97×V反總÷W÷T=80×(A+0.003)

T:反應時間,1h=1/24d; V反總:反應體系總體積0.6mL;W:樣本質量,0.02g。

 

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 4.485x -0.003;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值A。

單位的定義:每天每g土樣中產生1mg 紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。

S-PPO活力(mg/d/g 土樣)=(A+0.003) ÷4.485×V反總÷W÷T=160×(A+0.003)

T:反應時間,1h=1/24d; V反總:反應體系總體積0.6mL;W:樣本質量,0.02g。


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優利科(上海)生命科學有限公司

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