土壤汞（S-Hg）濃度檢測試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
土壤汞污染能夠通過食物鏈傳遞和富集，對植物、動物和人類健康產生威脅。礦山開發、工業加工、農業生產和生活垃圾常常造成土壤汞污染，因此評價和防止土壤重金屬污染常常需要測定土壤汞含量。
測定原理：
土壤經消化后，汞以Hg2+離子形式存在；Hg2+能與二硫腙生成橙色絡合物，溶于三氯jia烷后，在490nm測定吸光度，即可計算S-Hg含量。
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、可調式移液槍、100目篩（可更小）、濃硫酸、濃鹽酸、濃硝酸、三氯jia烷和蒸餾水。
試劑組成和配制：
標準品：液體×1支，4nmol/mL Hg標準液，4℃保存。
試劑一：自備。在該試劑瓶中加入52mL蒸餾水，36 mL濃鹽酸，12mL濃硝酸，混勻，4℃避光保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加18.4 mL蒸餾水充分溶解。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加3 mL蒸餾水充分溶解。
試劑四：粉劑×1支，4℃保存。臨用前加1.5 mL蒸餾水充分溶解。
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加5.2 mL蒸餾水充分溶解。
試劑六：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加20 mL三氯jia烷充分溶解。
S-Hg檢測：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，體積波長到490 nm，三氯jia烷調零。
2. 樣品管：風干的土壤，過100目篩后精確稱取0.1 g左右，裝入EP管；加入1 mL試劑一，充分混勻后沸水浴消化60 min。取出冷卻后室溫8000g離心10min，吸取20 μL上清液加入新的EP管；再先后加入180 μL蒸餾水和20 μL濃硫酸，混勻；最后加入180 μL試劑二，混勻后40℃水浴24h，期間震蕩數次。
2. 標準管：取EP管，加入20 μL標準液，180 μL蒸餾水和20 μL濃硫酸，混勻；最后加入180 μL試劑二，混勻后40℃水浴24h，期間震蕩數次。
3. 加入20 μL試劑三，震蕩直到無色；開蓋靜置30min，期間搖蕩數次，以排出氣體。
4. 加入10 μL試劑四，充分混勻后靜置5min；加入50μL試劑五，蓋緊后震蕩至少1min，靜置10min以分層。
5. 小心吸取20 μL下層溶液，加入200 μL試劑六，震蕩使無色，靜置10 min以分層。
6. 小心吸取140 μL下層溶液，加入微量玻璃比色皿/96孔板，于490nm處比色，記錄各管吸光值。記為A樣品管和A標準管。
注意：標準管只需測定一次。
S-Hg濃度計算公式：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
Hg（nmol Hg/g 干重）=[C標×(A測定管÷A標準管)]×V總÷V樣÷W
=200×(A測定管÷A標準管)÷W
C標：標準液濃度，4 nmol/mL Hg；V總：上清液總體積，1 mL；W：土樣質量，g；V樣：加入上清液體積，20 μL=0.02 mL。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
Hg（nmol Hg/g干重）=[C標×(A測定管÷A標準管)]×V總÷V樣÷W
=200×(A測定管÷A標準管)÷W
C標：標準液濃度，4 nmol/mL Hg；V總：上清液總體積，1 mL；W：土樣質量，g；V樣：加入上清液體積，20 μL=0.02 mL。
注意事項：
1、試劑一有刺激性氣味，易揮發，實驗過程中應注意佩戴口罩和手套，使用完立即蓋好蓋子，以免試劑不夠；
2、測定過程中需加入濃硫酸，加濃硫酸時需注意，避免濺到皮膚或眼睛上；
3、靜置分層后，用1mL移液槍，排除空氣后，輕輕插入下層溶液中，緩慢吸取下層溶液。
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