土壤過氧化氫酶(Solid-Catalase,S-CAT)試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
S-CAT是土壤微生物代謝的重要酶類,在H2O2清除系統中具有重要作用。
測定原理:
H2O2在240nm下有特征吸收峰,通過測定與土壤反應后溶液在此波長下吸光度的變化,即可反應S-CAT活性的高低。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)和蒸餾水
試劑組成和配制:
試劑一:液體300μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入29.7mL蒸餾水充分溶解后待用;用不完的試劑4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存(如出現結晶析出,60℃-90℃水浴溶解后使用);
試劑三:液體3mL×1瓶,4℃保存。
樣品處理:
新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干,過30~50目篩。
測定步驟:
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至240nm,蒸餾水調零。
2、 測定前務必準備96孔UV板一塊(UV板不是普通酶標板,普通酶標板只能透過可見光,不能透過紫外光,檢測波長小于340nm務必使用UV板)。
3、 加樣表
試劑名稱 | 測定管 | 無基質管 | 無土管 |
風干土樣(g) | 0.03 | 0.03 | |
試劑一(μL) | 260 | 260 | |
蒸餾水(μL) | 260 |
25℃振蕩培養 20min
試劑二(μL) | 10 | 10 | 10 |
混勻8000g,25℃離心5min,取180uL上清
試劑三(μL) | 20 | 20 | 20 |
混勻, 240nm處記錄各管吸光值A。
注意:每個測定管要設一個無基質管,無土管只要做一管。
S-CAT活性計算:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
單位的定義:每天每g風干土樣催化1μmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
計算公式:S-CAT(μmol/d/g)=[(A無土管-A測定管+A無基質管)×V反總÷(ε×d)×106]÷W÷T=16.5×(A無土管-A測定管+A無基質管)
V反總:反應體系總體積,3×10-4 L;ε:過氧化氫摩爾消光系數,4.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm; T:反應時間,20 min=1/72d; W:樣本質量,0.03g。
b. 用96孔板測定的計算公式如下
單位的定義:每天每g風干土樣催化1μmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
計算公式:S-CAT(μmol/d/g)=[(A無土管-A測定管+A無基質管)×V反總÷(ε×d)×106]÷W÷T=33×(A無土管-A測定管+A無基質管)
V反總:反應體系總體積,3×10-4 L;ε:過氧化氫摩爾消光系數,4.36×104 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm; T:反應時間,20 min=1/72d; W:樣品質量,0.03g。
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