土壤過氧化物酶（Solid- Peroxidase，S-POD）試劑盒說明書
微量法100管/96樣
注 意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
S-POD主要來源于土壤微生物，能夠氧化土壤有機(jī)物質(zhì)產(chǎn)生過氧化物，在腐殖質(zhì)的形成過程中具有重要作用。
測定原理：
S-POD催化有機(jī)物質(zhì)氧化成醌，后者在430nm有特征光吸收。
自備用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、yi醚50mL（不允許快遞）和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：粉劑×2瓶，4℃保存；臨用前取一瓶，加入6mL蒸餾水充分溶解后待用；用不完的試劑4℃保存一周。
試劑二：液體2.5mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體6mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：yi醚50mL×1瓶，4℃保存；（自備）
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
測定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至430nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 加樣表
試劑名稱 | 測定管 |
風(fēng)干土樣（g） | 0.02 |
試劑一（μL） | 100 |
試劑二（μL） | 20 |
振蕩混勻，30℃恒溫培養(yǎng)1 h
試劑三（μL） | 50 |
試劑四（μL） | 430 |
振蕩數(shù)次，25℃室溫靜置30min，吸取200μL上層液于430nm處測定吸光值A(chǔ)
（注意：1、因yi醚粘度小，易掉液，吸取前需先將槍頭在上層液里潤洗2~3次，再轉(zhuǎn)移測定；2、yi醚易揮發(fā)，轉(zhuǎn)移到96孔板后立即測定，最好一個(gè)一個(gè)測定）。
S-POD活力計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 8.97x -0.003；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值A(chǔ)。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 紫色沒食子素定義為一個(gè)酶活力單位。
S-POD活力（mg/d/g 土樣）＝(A+0.003) ÷8.97×V反總÷W÷T=80×(A+0.003)
T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d； V反總：反應(yīng)體系總體積0.6mL；W：樣本質(zhì)量，0.02g。
b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 4.485x -0.003；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值A(chǔ)。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 紫色沒食子素定義為一個(gè)酶活力單位。
S-POD活力（mg/d/g 土樣）＝(A+0.003) ÷4.485×V反總÷W÷T=160×(A+0.003)
T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d； V反總：反應(yīng)體系總體積0.6mL；W：樣本質(zhì)量，0.02g。
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優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
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資料大小 |
37.5KB | 資料類型 |
WORD 文檔 |
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