土壤堿性蛋白酶(Solid - Alcalase Protease,S-ALPT)
試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化,其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。S-ALPT在堿性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解,與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。
測定原理:
堿性條件下,S-ALPT可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸;在堿性條件下,酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán);在680nm有特征吸收峰。
實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、雙蒸水
試劑組成和配置:
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入6ml蒸餾水充分溶解;用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入2mL試劑七,沸水浴加熱溶解,然后加入8ml試劑一,充分混勻備用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入30ml蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存;
試劑五:液體8mL×1瓶,4℃保存;
試劑六:液體1.5mL×1支,0.05mg/ml標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液,4℃保存;
試劑七:液體5mL×1瓶,4℃保存;
樣品處理:
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。
測定操作:
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至680nm,蒸餾水調(diào)零。
2、試劑二、三和四40℃水浴10min。
3、樣本測定:
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風(fēng)干土樣(g) | 0.02 | 0.02 |
試劑一(μL) | 150 | |
試劑三(μL) | 150 |
混勻后,40℃水浴30min,振蕩5-6次,使土樣與反應(yīng)液充分接觸
試劑二(μL) | 50 | 50 |
混勻,8000g 25℃離心10min,取上清液,在EP管或96孔板中加入下列試劑
測定管 | 對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | |
上清液(μL) | 60 | 60 | |
試劑六(μL) | 60 | ||
試劑四(μL) | 280 | 280 | 280 |
試劑五(μL) | 60 | 60 | 60 |
混勻,40℃水浴20min,8000g 25℃離心10min,取上清液200μL,680nm下讀取各管吸光值A
注意:標(biāo)準(zhǔn)管只需測一次。每個測定管設(shè)一個對照管。
S-ALPT活性計(jì)算:
單位定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1mg酪氨酸為一個 S-ALPT活力單位。
S-ALPT(mg/d/g土樣)=C標(biāo)準(zhǔn)×(A測定管-A對照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管×V反總÷W÷T=24×(A測定管-A對照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管
C標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.05mg/mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;T:反應(yīng)時間,30min=1/48d; W:樣本質(zhì)量,0.02g。
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優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
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