土壤錳過氧化物酶(Soil manganese peroxidase,S-Mnp)試劑盒說明書
微量法100T/48S
注 意 :正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
錳過氧化物酶(EC1.11.1.13)是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶,主要存在于擔(dān)子菌中,屬于木質(zhì)素降解酶系,能有效的降解木質(zhì)素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物,疊氮化合物、DTT,多環(huán)芳烴等。
測(cè)定原理:
錳過氧化物酶在Mn2+存在的條件下,將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚,在465nm有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀、甲苯。
試劑組成和配制:
試劑一:液體12mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體2mL×1支,4℃保存。
試劑三:液體4mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體2mL×1支,4℃保存。
樣品處理:
新鮮土樣風(fēng)干,過30-50目篩。
測(cè)定操作:
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
土樣(mg) | 40 | 40 |
甲苯(μL) | 30 | 30 |
25℃,靜置15min | ||
試劑一(μL) | 140 | 120 |
試劑二(μL) | 20 | |
試劑三(μL) | 40 | 40 |
試劑四(μL) | 20 | 20 |
充分混勻,于30℃震蕩反應(yīng)3h,于10000rpm,4℃離心10min,取150μL于微量石英比色皿/96孔板,測(cè)定465nm處吸光值,記為A對(duì)照管和A測(cè)定管,△A=A測(cè)定管- A對(duì)照管 |
酶活計(jì)算公式:
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
酶活性定義:每克土壤每天氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
S-MnP活性(nmol/d /g 土樣)= ×V反總÷W÷T= 66.4×△A÷W
ε:愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù):12100L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,3h
b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
酶活性定義:每克土壤每天氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
S-MnP活性(nmol/d /g土樣)= ×V反總÷W÷T= 132.8×△A÷W
ε:愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù):12100L/mol/cm;d:比色皿光徑,0.5cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,3h
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優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
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資料大小 |
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WORD 文檔 |
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