土壤硝態氮試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
硝態氮是指硝酸鹽中所含有的氮元素，土壤中的有機物分解生成銨鹽，被氧化后變為硝態氮。土壤中硝態氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接關系到作物的產量與品質。
測定原理：
在濃酸條件下，NO3-與水楊酸反應，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH>12）呈黃色，在一定范圍內，其顏色深淺與含量成正比，可比色測定計算得硝態氮含量。
自備實驗用品及儀器：
蒸餾水、天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、振蕩儀。
試劑組成和配制：
試劑一：粉劑×2支，4℃避光保存。臨用前根據用量每支加1mL濃硫酸充分溶解。
試劑二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
樣本處理：
按照土壤質量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g新鮮土樣，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，置于振蕩儀中振蕩提取1h，25℃，10000g離心10min，取上清待測。
測定操作表：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至410nm，蒸餾水調零。
2、 操作表（于EP管中加入下列試劑）
空白管 | 測定管 | |
樣本（μL） | 10 | |
蒸餾水（μL） | 10 | |
試劑一（μL） | 20 | 20 |
充分混勻，25℃靜置30min | ||
試劑二（μL） | 475 | 475 |
混勻，渦旋振蕩，使出現的沉淀充分溶解，轉移200uL至微量石英比色皿/96孔板中測定410nm處吸光值A，△A=A測定管-A空白管 | ||
計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0156x+0.0073，R2=0.9997
NO3—— N含量（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V樣總）
=64.1×（△A-0.0073）÷W
V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g
b. 用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0078x+0.0073，R2=0.9997
NO3—— N（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V樣總）
=128.2×（△A-0.0073）÷W
V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g
注意事項：
1. 硝酸根不為土壤膠體吸附，且易溶于水，很容易在土壤內部移動，所以測定此指標時應注意采樣深度一致。
2. 土壤經風干或者烘干很容易引起NO3—— N的變化，所以最好采用新鮮土壤進行測定，以準確反映該指標含量。
3. 試劑一配制好后盡快使用，4℃可保存一周。
4. 試劑一和試劑二均具有強腐蝕性，操作時需做好防護措施。
5. Z低檢出限為100μg/kg。
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