土壤熒光素二乙酸酯（FDA）水解酶（Soil-Fluorescein diacetate，S-FDA）試劑盒說明書
微量法 100T/48S
注 意 ：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
FDA 水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機質(zhì)的轉(zhuǎn)化，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標之一。
測定原理：
FDA 是一種無色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩(wěn)定不易被分解，并在 490nm 處有強吸收峰，通過檢測 490nm 處的吸光值變化可計算得FDA 水解酶活性。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制：
標準液：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑 1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加 4mL 試劑三溶解。
試劑三：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。
樣本處理：
稱取風(fēng)干過 30-50 目篩土壤約 0.1g，備用。
測定操作表：
空白管 | 標準管 | 對照管 | 測定管 | |
樣本（g） | 0.05 | 0.05 | ||
標準液（μL） | 40 | |||
雙蒸水（μL） | 40 | |||
試劑一（μL） | 200 | 200 | 240 | 200 |
試劑二（μL） | 40 | |||
充分混勻，30℃，震蕩 1h | ||||
試劑三（μL） | 160 | 160 | 160 | 160 |
10000g，25℃，離心 5min，取 200μL 上清于微量石英比色皿/96 孔板中測定 490nm 處吸 光值A，△A1=A 標準管-A 空白管，△A2=A 測定管-A 對照管 | ||||
注 意：空白管和標準管只需測定一次。
酶活性計算公式：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個酶活力單位。
S-FDA 活性（μmol/d/g 土樣）=（△A2÷△A1×C 標準品）×V 反總÷W
= 0.96×（△A2÷△A1）÷W
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個酶活力單位。
S-FDA 活性（μmol/d/g 土樣）=（△A2÷△A1×C 標準品）×V 反總÷W
= 0.96×（△A2÷△A1）÷W
C 標準品：
標準品濃度 100μmol/L；V 反總：反應(yīng)總體積，0.4mL；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項：
1.盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品，否則很難準確反映酶的活性。
2.測定之前進行預(yù)實驗，若吸光值較高，請進行適當?shù)南♂屧贉y定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
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