土壤總磷/有機磷/無機磷含量測定試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
土壤總磷包括有機磷和無機磷，其中無機磷能夠直接被植物利用。土壤有機磷經(jīng)過礦化分解而轉(zhuǎn)化為無機磷。同時測定土壤總磷、有機磷和無機磷，可以全面反映土壤磷營養(yǎng)狀況。
測定原理：
利用鉬藍法定磷。取一份土樣，通過浸提法測定土壤無機磷含量；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼燒后，土壤有機磷轉(zhuǎn)化為無機磷，測得土壤總磷含量；總磷含量減去無機磷含量，即可計算出有機磷含量。
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐、蒸餾水、100目篩子（可更小）。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋10倍后再用。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入8mL蒸餾水，充分溶解后加入4mL試劑二，混勻。
標準品：液體×1支，20 μmol/L無機磷標準品，4℃保存。
土壤不同形態(tài)磷提取：
1.無機磷：稱取通過100目篩子的風干土樣0.01g，轉(zhuǎn)移到1mL離心管，加入1mL試劑一，震蕩混勻，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃離心10min，取上清液一，用于無機磷含量測定。
2.總磷提取：取通過100目篩子的風干土樣，550℃灼燒1h，冷卻后稱取約0.01g，轉(zhuǎn)移到1 mL離心管，加入1mL試劑一，震蕩混勻，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃離心10min，取上清液二，用于總磷含量測定。
測定步驟：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調(diào)節(jié)波長到660 nm，蒸餾水調(diào)零。
2.打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到40℃。
3. 空白管：取EP管，依次加入100μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標準管：取EP管，依次加入10μL標準液，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A標準管。
5. 測定管：取EP管，依次加入10μL上清液一或者上清液二，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A測定管。
注意：空白管和標準管只需測定一次。
土壤磷含量計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1.土壤無機磷含量（μmol /g 干重）=[C標準液×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×V總÷W
=0.02×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)÷W
C標準液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V總：上清液一總體積，1 mL=0.001 L。
2.土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C標準液×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×V總÷W
=0.02×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)÷W
C標準液：20 μmol/L；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V總：上清液二總體積，1mL=0.001 L。
3.土壤有機磷（μmol /g干重）=土壤總磷-土壤無機磷
4.
b. 使用96孔板測定的計算公式如下
1.土壤無機磷含量（μmol /g 干重）=[C標準液×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×V總÷W
=0.02×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)÷W
C標準液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V總：上清液一總體積，1 mL=0.001 L。2. 土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C標準液×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×V總÷W
=0.02×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)÷W
C標準液：20 μmol/L；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V總：上清液二總體積，1mL=0.001 L。
3．土壤有機磷（μmol /g 干重）=土壤總磷-土壤無機磷
注意事項：
試劑三配制過程中，可能會產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時不要將黑色固體吸入。
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