還原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
GSH是細胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質，在抗氧化、蛋白質巰基保護和氨基酸跨膜運輸?shù)戎芯哂兄匾饔谩＿€原型與氧化型比值（GSH/GSSG）是細胞氧化還原狀態(tài)的主要動態(tài)指標。因此，測定細胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態(tài)。
測定原理：
DTNB與GSH反應生成復合物，在412nm處有特征吸收峰；其吸光度與GSH含量成正比。
自備儀器和用品：
低溫離心機、水浴鍋、可調節(jié)移液器、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
GSH測定操作：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節(jié)波長到412 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑二置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）水浴中保溫30min。
3. 空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，依次加入20μL蒸餾水，140μL試劑二，40μL試劑三，混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A1。
4. 測定管：取微量玻璃比色皿或96孔板，依次加入20μL上清液，140μL試劑二，40μL試劑三，混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A2。
注意：空白管只需要測定一次。
GSH含量計算公式：
GSH標準曲線公式：y=1.5 x（x為GSH濃度，μ mol /mL；y為吸光值）
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷（V樣×Cpr） =0.667×(A2－A1) ÷Cpr
（2）按樣本質量計算
GSH（μ mol/g 鮮重）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=0.667×(A2－A1) ÷W
（3）按細胞數(shù)量計算
GSH（μ mol /104 cell）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量)=0.667×(A2－A1) ÷細胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
GSH（μ mol/ mL）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷V樣 =0.667×(A2－A1)
V反總：反應總體積，0.2mL；V樣總：上清液總體積，1 mL；V樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量
b.使用96孔板測定的計算公式如下
GSH標準曲線公式：y=0.75x（x為GSH濃度，μ mol /mL；y為吸光值）
（1）按蛋白濃度計算
GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷0.75×V樣÷V樣÷Cpr =1.334×(A2－A1) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
GSH（μ mol/g 鮮重）=(A2－A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=1.334×(A2－A1) ÷W
（3）按細胞數(shù)量計算
GSH（μ mol /104 cell）=(A2－A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量)=1.334×(A2－A1) ÷細胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
GSH（μ mol/ mL）=(A2－A1) ÷0.75×V反總÷V樣 =1.334×(A2－A1)
V樣總：上清液總體積，1mL；V樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g。
注意事項：
1. 試劑一中含有蛋白質沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。
2. Z低檢出限為0.011mmol/L。
3
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務