精品亚洲a∨无码专区毛片-精品亚洲aⅴ无码午夜在线-精品亚洲aⅴ无码午夜在线观看-精品亚洲aⅴ无码一区二区三区-精品亚洲aⅴ无码专区毛片-精品亚洲aⅴ在线

您好, 歡迎來到化工儀器網

| 注冊| 產品展廳| 收藏該商鋪

15021281375

Download

首頁   >>   資料下載   >>   谷胱甘肽S-轉移酶(glutathione S-transferase,GST)試劑盒說明書

優利科(上海)生命科學有...

立即詢價

您提交后,專屬客服將第一時間為您服務

谷胱甘肽S-轉移酶(glutathione S-transferase,GST)試劑盒說明書

閱讀:328      發布時間:2023-10-16
分享:

谷胱甘肽S-轉移酶glutathione S-transferaseGST試劑盒說明書

                                              微量法100T/96S

 

    意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

GST是一種具有多種生理功能的蛋白質家族,主要存在于細胞質內。GST是體內解毒酶系統的重要組成部分,主要催化各種化學物質及其代謝產物與GSH的巰基共價結合,使親電化合物變為親水物質,易于從膽汁或尿液中排泄,達到將體內各種潛在或具備毒性的物質降解并排出體外的目的。因此,GST在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發揮著重要的生物學功能。此外,因為GST具有GSH-Px活性,亦稱為non-Se GSH-Px,具有修復氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質等的功能。注意,GST催化的反應減少GSH含量,但是不增加GSSG含量。

 

測定原理:

GST催化GSHCDNB結合,其結合產物的光吸收峰波長為340nm;通過測定340nm波長處吸光度上升速率,即可計算出GST活性。

 

自備儀器和用品:

低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。

 

試劑組成和配置:

試劑一:液體120mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體22mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加2 mL蒸餾水溶解。

 

粗酶液提取:

1.        組織:按照組織質量(g:試劑一體(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g4離心10min,取上清置冰上待測。

2.        細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g4,離心10min,取上清置于冰上待測。

3.  血清等液體:直接測定。

測定:

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min,調節波長到340 nm,用蒸餾水調零。

2. 試劑三放在25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)保溫。

3. 測定管:取微量石英比色皿或96孔板,加入20μL上清液,180μL試劑二和20μL試劑三,迅速混勻后于340nm測定吸光度變化,記錄10 s310 s吸光度為A1A2

 

GST活性計算公式:

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

(1). 按蛋白濃度計算

 

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1nmol/L CDNBGSH結合為1個酶活單位。

GSTnmol/min/mg prot=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(Cpr×V)÷T

=230×(A2-A1) ÷Cpr

(2). 按樣本質量計算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每克樣品每分鐘催化1nmol/L CDNBGSH結合為1個酶活單位。

GSTnmol/min/g 鮮重=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(W×V÷V樣總)÷T

=230×(A2-A1)÷W

3)按細胞數量計算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每104個細胞每分鐘催化1nmol/L CDNBGSH結合為1個酶活單位。

GSTnmol/min/104 cell=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(細胞數量×V÷V樣總)÷T

=230×(A2-A1) ÷細胞數量

4)按液體體積計算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每毫升液體每分鐘催化1nmol/L CDNBGSH結合為1個酶活單位。

GSTnmol/min/mL=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷V÷T

                   = 230×(A2-A1)

ε:產物摩爾消光系數,9.6×103 L/mol /cmd:比色皿光徑,1cm1061mol=1×106μmolV反總:反應體系總體積,220μL=2.2×10-4 LCpr:上清液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定,建議選用本公司生產的BCA蛋白質濃度測定試劑盒;W :樣品質量;V樣:加入反應體系中上清液體積,20μL=0.02 mLV樣總:提取液體積,1 mLT:反應時間(min),5min

 

b.使用96孔板測定的計算公式如下

(1). 按蛋白濃度計算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1nmol/L CDNBGSH結合為1個酶活單位。

GSTnmol/min/mg prot=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(Cpr×V)÷T

=460×(A2-A1) ÷Cpr

(2). 按樣本質量計算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每克樣品每分鐘催化1nmol/L CDNBGSH結合為1個酶活單位。

GSTnmol/min/g 鮮重=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(W×V÷V樣總)÷T

=460×(A2-A1)÷W

3)按細胞數量計算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每104個細胞每分鐘催化1nmol/L CDNBGSH結合為1個酶活單位。

GSTnmol/min/104 cell=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(細胞數量×V÷V樣總)÷T

=460×(A2-A1)÷細胞數量

4)按液體體積計算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每毫升液體每分鐘催化1nmol/L CDNBGSH結合為1個酶活單位。

GSTnmol/min/mL=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷V÷T

                   =460×(A2-A1)

ε:產物摩爾消光系數,9.6×103 L/mol /cmd96孔板光徑,0.5cm1061mol=1×106μmolV反總:反應體系總體積,220μL=2.2×10-4 LCpr:上清液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定,建議選用本公司生產的BCA蛋白質濃度測定試劑盒;W :樣品質量;V樣:加入反應體系中上清液體積,20μL=0.02 mLV

 

樣總:提取液體積,1 mLT:反應時間(min),5min

 

注意事項:

1. 樣品處理等過程均需要在冰上進行,且須在當日測定酶活力;

2. 細胞中GST活性測定時,細胞數目須在300-500萬之間,細胞中GST的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理,不能用細胞裂解液處理細胞;

3. 本法測定GST活性的線性范圍可達76 μmol/min /L,測定前先用12個樣做預實驗,如5min內反應不成線性,須對樣品用蒸餾水稀釋,計算結果乘以稀釋倍數;

4. 測定反映的溫度對測定結果有影響,請控制在25℃或者37℃(哺乳動物)。

提供商

優利科(上海)生命科學有限公司

下載次數

29次

資料大小

34.5KB

資料類型

WORD 文檔

資料圖片

點擊查看

瀏覽次數

328次

產品展示

會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 中文字幕人妻无码专区| 国产毛片久久久久久久精品| 亚洲一区二区三区av在线观看 | 在线观看亚洲专区中文字幕 | 欧美猛少妇色xxxxx| 精品多人p群无码专区| 亚洲蜜桃mv在线播放| 麻豆文化传媒官方网站入口免费| 国产无遮挡A片又黄又爽小说| 亚洲精品乱码久久久久久自慰 | 国产欧美日韩户外自拍| 亚洲 综合 欧美在线视频 | 国产精品亚洲色婷婷99久久精品| 无码福利日韩神码福利片| 色天天综合网| 国产福利午夜波多野结衣| 人之初激絶頂痙攣在线观看| 日本 一 级 视频| 顶级丰满少妇自慰到喷水| 欧美做愛坉片| 精品无码日本蜜桃麻豆| 成人AV久久一区二区三区| 久热首页| 很黄很爽无遮挡免费| 欧美一区二区三区免费观看| 精品国产一区二区三区久久狼黑人 | 国产999免费视频| 欧美又粗又大XXXX无码| 东京热中文无码 在线| 91精品国产综合久久| 久久久精品不卡一区二区 | 激情综合丝袜美女一区二区| 亚洲欧美国产制服日本一区二区| 亚洲午夜久久久精品影院| 国产精品原创永久在线观看| 日韩黄色小说| 青青国产线观观看视频| 成人精品综合免费视频| 蜜桃色永久入口| 成人一区二区三区视频免费| 91精品国产成人|