血清鐵濃度檢測試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
血清鐵是指血液中轉鐵蛋白所結合的鐵,該指標常用于鑒別缺鐵性與非缺鐵性貧血。
測定原理:
亞硫酸鈉還原血清Fe3+生成成Fe2+,Fe2+進一步與2, 2’- 聯吡啶顯色,在520nm處有吸收峰,測定該波長光吸收值即可計算血清鐵含量。
自備儀器和用品:
離心機、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、冰醋酸、氯仿和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前配制,加入15 mL蒸餾水充分溶解。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前配制,加入469μL冰醋酸,加入15 mL蒸餾水充分溶解。
標準液:液體1mL×1支(EP管),100 μmol/L Fe3+標準液,4℃保存。
測定:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min,調節(jié)波長到520 nm,蒸餾水調零。
2. 標準液解凍:提前取出標準液,置于室溫下充分解凍后混勻。
3. 空白管:取EP管,依次加入125 μL蒸餾水,125 μL試劑一,125 μL試劑二,混勻后蓋緊,置于沸水浴5min,自來水冷卻。加入62 μL氯仿(自備),充分震蕩混勻;室溫10000rpm,離心10min,小心吸取上層液210 μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于520 nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標準管:取EP管,依次加入125 μL標準液,125 μL試劑一,125 μL試劑二,混勻后蓋緊,置于沸水浴5min,自來水冷卻。加入62 μL氯仿,充分震蕩混勻;室溫10000rpm,離心10min,小心吸取上層液210 μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于520 nm測定吸光度,記為A標準管。
5. 測定管:取EP管,依次加入125 μL血清,125 μL試劑一,125 μL試劑二,混勻后蓋緊,置于沸水浴5min,自來水冷卻。加入62 μL氯仿,充分震蕩混勻;室溫10000rpm,離心10min,小心吸取上層液210 μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于520 nm測定吸光度,記為A測定管。
注意:空白管和標準管只需測定一次。
血清鐵濃度計算公式:
血清鐵含量(μmol /dL)=[C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)]×V總
=10 × (A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)
C標準液:100 μmol/L Fe3+標準液;V總:標準液總體積1mL;1 dL=0.1 L。
注意事項:
1、血清鐵含量少,所用器皿(EP管)需要注意,避免被鐵污染。
2、試劑一和試劑二溶液不穩(wěn)定,需現配現用,新配制的試劑只能當天使用。
3. Z低檢出限為1μmol/L。
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