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組織無機磷含量測定試劑盒說明書

閱讀:314      發布時間:2023-10-19
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組織無機磷含量測定試劑盒說明書

                                                微量法100T/96S

 

    意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

無機磷主要指磷酸根,參與生物體內多種代謝,包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質磷酸化和脫磷酸化等等,此外促進碳水化合物的合成、轉化和轉運。

 

測定原理:

鉬藍與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質,通過測定660nm光吸收,即可計算無機磷含量。

 

自備儀器和用品:

離心機、水浴鍋、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。

 

試劑組成和配置:

試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體5mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前配制,加入10 mL蒸餾水,充分溶解后加入試劑二(全部),混勻。

標準品:液體×1支。

 

無機磷提取:

按照組織質量(g:試劑一體(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。10000rpm4離心10min,取上清,置冰上待測。

 

測定:

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min,調節波長到660 nm,蒸餾水調零。

2.打開水浴鍋,調節溫度到40℃

3. 空白管:0.5mL EP管,依次加入100μL蒸餾水,100μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A空白管。

4. 標準管:0.5mL EP管,依次加入10μL標準液,90μL蒸餾水,100μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A標準管。

5. 測定管:0.5mL EP管,依次加入10μL上清液,90μL蒸餾水,100μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A測定管。

注意:空白管和標準管只需測定一次。

 

組織無機磷含量計算:

(1)         按照蛋白含量計算

無機磷含量(μmol/mg prot)= [C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)]×V÷Cpr

=1×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr

 

(2)  按照樣本質量計算

無機磷含量(μmol/g 鮮重 )= [C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)]×V÷W

=1×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷W

C標準液:1mmol/LV總:上清液總體積,1mL=0.001 LW:樣品質量,g

 

注意事項:

1.        試劑三需臨用前配制,并且當天使用完畢。

2.        40min內完成比色。

3.        Z低檢出限為10μmol/L

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優利科(上海)生命科學有限公司

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