精品亚洲a∨无码专区毛片-精品亚洲aⅴ无码午夜在线-精品亚洲aⅴ无码午夜在线观看-精品亚洲aⅴ无码一区二区三区-精品亚洲aⅴ无码专区毛片-精品亚洲aⅴ在线

您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)

| 注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏該商鋪

15021281375

Download

首頁   >>   資料下載   >>   果糖-6-磷酸激酶(6-phosphofructokinase,PFK)試劑盒說明書

優(yōu)利科(上海)生命科學有...

立即詢價

您提交后,專屬客服將第一時間為您服務

果糖-6-磷酸激酶(6-phosphofructokinase,PFK)試劑盒說明書

閱讀:303      發(fā)布時間:2023-10-24
分享:

果糖-6-磷酸激酶(6-phosphofructokinasePFK)試劑盒說明書

                                               微量法100/96

 

 

   正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義

PFKEC 2.7.1.11廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,負責將果糖-6-磷酸和ATP轉化為果糖-1,6二磷酸和ADP,是糖酵解過程的關鍵調節(jié)酶之一。

 

測定原理

PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映PFK活性。

 

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制

提取液:100mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體20mL×1瓶,4保存;

試劑二:粉劑×1瓶,-20保存;

試劑三:粉劑×1支,4保存;

試劑四:液體8μL×1支,4保存;

 

樣本的前處理

1、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為1000~50001的比例(建議2000萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。

 

測定步驟

1、  分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長至340nm,蒸餾水調零。

2、  樣本測定

1)在試劑二瓶中加入17mL試劑一和1.13mL蒸餾水充分溶解,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融

2)在試劑三中加入1mL蒸餾水充分混勻,冰上放置備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融

3在試劑四中加入1mL蒸餾水充分混勻,冰上放置待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍

 

4)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑三、10μL試劑四和170μL試劑二,混勻,立即記錄340nm20s時的吸光值A1 10min20s后的吸光值A2計算ΔA=A1-A2

注意:不同勻漿組織中PFK活力不一樣,做正式試驗之前請做1-2只預試,若ΔA>0.5,則說明活力太高,必須用提取液稀釋成適當濃度勻漿上清液(計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)),或縮短反應時間至2min5min,使ΔA<0.5,以提高檢測靈敏度。

 

PFK活力單位的計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清(漿)PFK活力的計算:

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP轉化為1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmol ADP定義為一個酶活力單位。

PFKnmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷V÷T=321×ΔA

2、組織、細菌或細胞中PFK活力計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP轉化為1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmol ADP定義為一個酶活力單位。

PFKnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每分鐘催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP轉化為1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmol ADP定義為一個酶活力單位。

PFKnmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總)÷T=321×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP轉化為1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmol ADP定義為一個酶活力單位。

PFKnmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(2000×V÷V樣總)÷T=0.1605×ΔA

V反總:反應體系總體積,2×10-4 LεNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.01 mLV樣總:加入提取液體積,1 mLT:反應時間,10 minCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g2000:細菌或細胞總數(shù),2000萬。

 

b.96孔板測定的計算公式如下

1、血清(漿)PFK活力的計算:

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP轉化為1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmol ADP定義為一個酶活力單位。

PFKnmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷V÷T=642×ΔA

2、組織、細菌或細胞中PFK活力計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP轉化為1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmol ADP定義為一個酶活力單位。

PFKnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=642×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每分鐘催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP轉化為1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmol

 

ADP定義為一個酶活力單位。

PFKnmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W× V÷V樣總)÷T=642×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP轉化為1nmol果糖-1,6-二磷酸和1nmol ADP定義為一個酶活力單位。

PFKnmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(2000×V÷V樣總)÷T=0.321×ΔA

V反總:反應體系總體積,2×10-4 LεNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd96孔板光徑,0.5cmV樣:加入樣本體積,0.01 mLV樣總:加入提取液體積,1 mLT:反應時間,10 minCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g2000:細菌或細胞總數(shù),2000萬。

提供商

優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司

下載次數(shù)

2次

資料大小

36.5KB

資料類型

WORD 文檔

資料圖片

點擊查看

瀏覽次數(shù)

303次

產(chǎn)品展示

會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 熟妇人妻中文字幕无码老熟妇 | 免费的又色又爽又黄的视频软件 | 美女露出尿口让男人揉动态图网站| 东京热高清不卡二区三区高清無tv碼| 欧美亚洲国产中文日韩一区二区| 四虎永久免费观看在线| 国产99综合精品一区二区| 欧美午夜一艳片欧美精品| 国产精品人人妻人色五月| 99久久亚洲国产精| 久久久精品区二区三区免费9亚洲国产婷婷香蕉久久久久久 | 五月色丁香婷婷网蜜臀AV| 日本亚洲高清| 国产亚洲欧美在线观看四区| 亚洲AV永久无码国产精品久久| 国产浮力草草影院CCYY| 狠狠色噜噜狠狠狠狠色综合久| 亚洲免费无码激情| 四虎在线免费观看视频| 国产欧美日韩综合精品久久一区| 天天色图片| 无套内谢少妇毛片A片软件| 成人片黄网站色大片免费花季亚色| 麻豆成人影片在线 高清在线国产午夜| 亚洲欧美在线亚洲| 女同hd系列中文字幕| 国产在线a视频| 国产福利在 线观看视频| 日本人妻波多野吉衣无码视频 | 人妻中文字幕无码| 国产精品麻豆果冻传媒| 日本一区二区三区免费高清在线 | 国精产品69永久中国有限| 午夜一区二区在线观看| 四虎在线观看一区二区| 国产成人高清免费视频网站| 欧美日韩久久久精品A片| 国产大毛片| 亚洲国产日韩一区二区A片| 91精品国产91热久久p| 久久久久久国产精品免费免费 |