果糖-1,6-二磷酸(Fructose-1,6 Diphosphate,FDP)試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
果糖1,6-二磷酸是機體內的高能代謝物和代謝調控劑,是糖酵解途徑的重要中間體,廣泛存在于動植物和微生物體內,能影響細胞內鉀離子的濃度,改善葡萄糖和其他能量底物的代謝,促進組織氧的釋放,廣泛應用于臨床醫藥制劑。
測定原理:
醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸降解,產物與DNPH縮合成紫紅色物質,在540nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、研缽、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制:
試劑一:液體110mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體0.4mL×1支,4℃避光保存。
試劑三:液體4mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體16mL×1瓶,4℃保存。
樣品處理:
1. 組織:按照質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL試劑一)加入試劑一,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清待測。
2. 細胞:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清待測。
3. 液體:直接檢測。
測定操作:
對照管 | 測定管 | |
樣品(μL) | 20 | |
蒸餾水(μL) | 20 | |
試劑一(μL) | 44 | 40 |
試劑二(μL) | 4 | |
充分混勻,37℃反應30min | ||
試劑三(μL) | 40 | 40 |
充分混勻,37℃溫育10min | ||
試劑四(μL) | 160 | 160 |
充分混勻,于37℃溫育10min,于微量石英比色皿/96孔板,蒸餾水調零,測定540nm處吸光值,記為A對照管和A測定管,△A=A測定管- A對照管,對照管只要做一管。 |
計算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y= 0.6971x+0.0012,R2=0.9983
1.按照質量計算
FDP(mg/g 鮮重)= (△A-0.0012) ÷0.6971÷(W÷V樣總)
= 1.43×(△A-0.0012)÷W
2.按照細胞數量計算
FDP(mg/104 cell)= (△A-0.0012) ÷0.6971÷(細胞數量÷V樣總)
=1.43×(△A-0.0012)÷細胞數量
3.按照液體體積計算
FDP(mg/mL)= (△A-0.0012) ÷0.6971
= 1.43×(△A-0.0012)
W:樣本質量,g;V樣總:加入提取液體積,1mL
b. 用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y= 0.3486x+0.0012,R2=0.9983
1.按照質量計算
FDP(mg/g 鮮重)= (△A-0.0012) ÷0.3486÷(W÷V樣總)
= 2.87×(△A-0.0012)÷W
2.按照細胞數量計算
FDP(mg/104 cell)= (△A-0.0012) ÷0.3486÷(細胞數量÷V樣總)
= 2.87×(△A-0.0012)÷細胞數量
3.按照液體體積計算
FDP(mg/mL)= (△A-0.0012) ÷0.3486
= 2.87×(△A-0.0012)
W:樣本質量,g;V樣總:加入提取液體積,1mL
注意事項:
Z低檢出限為1.72 mg/L。
提供商 |
優利科(上海)生命科學有限公司 | 下載次數 |
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資料大小 |
40.5KB | 資料類型 |
WORD 文檔 |
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