葡萄糖-6-磷酸( Glucose 6-phosphate， 6P G)含量測定試劑盒說明書
微量法 100管/48樣
注 意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
6PG (Glucose-6-phosphate，葡萄糖-6-磷酸，又稱6-磷酸葡萄糖)，是糖酵解和磷酸戊糖途徑的中間產物，廣泛存在于動植物體和微生物中。在糖酵解的第一步反應中，葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸，然后通過磷酸葡萄糖異構酶的催化形成果糖-6-磷酸，以繼續糖酵解的其它步驟；而在戊糖磷酸途徑中，葡萄糖-6-磷酸是其第一個底物，該過程也是生成NADPH的主要途徑。此外，葡萄糖-6-磷酸也能轉化形成糖原或淀粉而被儲存起來。
測定原理：
6-磷酸葡萄糖脫氫酶可催化6PG和NADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH，NADPH在1-mPMS的作用下使WST-8顯橙黃色，在450 nm下測定吸光值。
需自備的儀器和用品：
酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體60 mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體12mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；
試劑三：液體1.5mL×1管， 4℃避光保存。
6PG提?。?/p>
1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）， 8000g，25℃離心10min，取上清待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿，8000g，25℃離心10min，取上清待測。
3、血清（漿）等液體樣品：直接測定。
測定步驟：
1、酶標儀預熱30min以上，調節波長至450nm。
2、試劑二的配制：臨用前加入3mL水充分溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存；
3、工作液的配制：臨用前按照樣本數量，按以下比例配制工作液
試劑名稱（μL） | 測定工作液 | 對照工作液 |
試劑一 | 100 | 100 |
試劑二 | 50 | |
水 | 50 | |
試劑三 | 10 | 10 |
4、樣本測定
按下表在96孔板中加入如下試劑
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 50 | 50 |
測定工作液 | 150 | |
對照工作液 | 150 |
37℃避光孵育30min，450nm下測定吸光值A測定與A對照，△A=A測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。
6PG含量計算：
1、標準條件下測定回歸方程為y = 3.8589x - 0.0016，R2 = 0.997； x為6PG含量（μmol/mL），y為吸光值。
2、按照血清（漿）體積計算
6PG含量（nmol/mL）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷V1×1000
=259.1×(△A+0.0016)
3、按照蛋白濃度計算
6PG含量（nmol/mg prot）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷(V1×Cpr)×1000
=259.1×(△A+0.0016) ÷Cpr
4、按照樣品質量計算
6PG含量（nmol/g鮮重）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷(W ×V1÷V2）×1000
=259.1×(△A+0.0016) ÷W
3、按照細菌或細胞密度計算
6PG含量（nmol/104 cell）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷（500×V1÷V2）×1000
=0.518×(△A+0.0016)
V1：加入反應體系中樣本體積，0.05mL；V2：加入提取液體積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬；1000，μmol到nmol的換算系數。
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