精品亚洲a∨无码专区毛片-精品亚洲aⅴ无码午夜在线-精品亚洲aⅴ无码午夜在线观看-精品亚洲aⅴ无码一区二区三区-精品亚洲aⅴ无码专区毛片-精品亚洲aⅴ在线

您好, 歡迎來到化工儀器網

| 注冊| 產品展廳| 收藏該商鋪

15021281375

Download

首頁   >>   資料下載   >>   糖原磷酸化酶b(Glycogen phosphorylase b,GPb)試劑盒說明書

優利科(上海)生命科學有...

立即詢價

您提交后,專屬客服將第一時間為您服務

糖原磷酸化酶b(Glycogen phosphorylase b,GPb)試劑盒說明書

閱讀:330      發布時間:2023-10-27
分享:

糖原磷酸化酶bGlycogen phosphorylase bGPb)試劑盒說明書

                                            微量法100/48

 

   意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylaseGPEC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個斷開α-14-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖原分子α-16-糖苷鍵分支點前4個葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶aGPa)和無活性的糖原磷酸化酶bGPb)兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸(5-AMP)存在下可被激活。

 

測定原理:

GP催化糖原和無機磷產生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測定NADPH上升速率,即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸(5-AMP)時測定GPGPaGPb)活性,未添加腺苷酸(5-AMP)時測定GPa活性,GP性-GPa活性得到GPb活性。

 

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

提取液:100mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體16 mL×1瓶, 4保存;

試劑二:粉劑×1瓶,-20保存;

試劑三:粉劑×1支,-20保存;

試劑四:粉劑×1支, -20保存;

試劑五:粉劑×1支, -20保存;

 

樣本的前處理:

按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

 

測定步驟:

1、  分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零;

2、  工作液的配制:臨用前將試劑二轉移到試劑一中混合溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

3、  試劑三的配制:臨用前在試劑三瓶中加入1mL蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

4、  試劑四的配制:臨用前在試劑四瓶中加入1mL蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

5、   試劑五的配制:臨用前在試劑五管中加入500μL蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保

 

6、   存,禁止反復凍融。

7、   將工作液、試劑三、試劑四和試劑五置于37預熱5分鐘;

8、   在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑三、10μL試劑四、10μL蒸餾水160μL工作液,立即混勻,記錄340nm5min后的A110min后的吸光值A2,計算ΔAGPa=A2-A1

9、   在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑三、10μL試劑四、10μL試劑五160μL工作液,立即混勻,記錄340nm5min后的A310min后的吸光值A4,計算ΔAGP=A4-A3

注意:由于每個樣本需要同時測一個GPGPaGPb)活性和一個GPa活性,因此本試劑盒100管測48個樣本。

 

GPb活性計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下:

1)按樣本蛋白濃度計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

GPbnmol/min/mg prot)=[(ΔAGPΔAGPa)×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=643×(ΔAGPΔAGPa)÷Cpr

2)按樣本鮮重計算

單位定義:每g組織每分鐘產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

GPbnmol/min/g 鮮重)=[(ΔAGPΔAGPa)×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總)÷T=643×(ΔAGPΔAGPa)÷W

V反總:反應體系總體積,2×10-4 LεNADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.01 mLV樣總:加入提取液體積,1 mLT:反應時間,5 minCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g

 

b.96孔板測定的計算公式如下:

1)按樣本蛋白濃度計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

GPbnmol/min/mg prot)=[(ΔAGPΔAGPa)×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=1286×(ΔAGPΔAGPa)÷Cpr

2)按樣本鮮重計算

單位定義:每g組織每分鐘產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

GPbnmol/min/g 鮮重)=[(ΔAGPΔAGPa)×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總)÷T=1286×(ΔAGPΔAGPa)÷W

V反總:反應體系總體積,2×10-4 LεNADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cmd96孔板光徑,0.5cmV樣:加入樣本體積,0.01 mLV樣總:加入提取液體積,1 mLT:反應時間,5 minCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g

提供商

優利科(上海)生命科學有限公司

下載次數

8次

資料大小

36KB

資料類型

WORD 文檔

資料圖片

點擊查看

瀏覽次數

330次

產品展示

會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 亚洲一区二区三区av天堂| 二级毛片在线观看| 亚洲综合日韩中文字幕v在线| 蜜月国产免费福利片| 黄色免费| 黄网址在线看| 国产精品综合AV一区二区国产馆| 97视频在线观看视频| 欧美在线亚洲| 国产欧美日韩精品二区特| 乱色熟女综合一区二区三区 | 精产国品一二三产品麻豆| 制服丝袜亚洲中文综合| 91亚洲一区二区三区| 伦理片免费秋霞e| 大香线蕉伊人久久| 日本无码色情三级播放| 精品无码色午夜| 潮吹喷水在线观看| 天堂欧美| 日韩亚洲欧美国产中文| 国产精品看片| 成年男性泄欲网站| 波多野吉衣免费一区| 国产一区二区三区日韩欧美| 日本一本二本免费视频在线观看| 日本巨乳亚洲高清| 成人免费无码婬片在线观看免费 | 国产欧洲野花视频WWW| 性一交一乱一A片WWW| 欧美一区二区三区不卡免费| 欧美熟妇另类久久久久久不卡| 免费无码一区二区三区A片蜜臀| 国产99久久久国产精品免费高清| 波多野结高清无码中文观看下载 | 国产午夜乱理| 强行征服丰满人妻| 国产精品视频一区牛牛视频| 国产久久久国产精品小说| 丁香五月天的最新地址| WWW国产精品内射熟女|