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丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量試劑盒說明書

閱讀:419      發布時間:2023-11-03
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丙二醛(malondialdehydeMDA)含量試劑盒說明書

                                         微量法100/96

 

 

   意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:                                      

氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質;后者逐漸分解為一系列復雜的化合物,其中包括MDA。通過檢測MDA的水平即可檢測脂質氧化的水平。


測定原理:

MDA與硫代巴bi妥酸(thiobarbituric acidTBA)縮合,生成紅色產物,在532nm有最大吸收峰,進行比色后可估測樣品中過氧化脂質的含量;同時測定600nm下的吸光度,利用532nm600nm下的吸光度的差值計算MDA的含量。


需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。


試劑的組成和配置:

提取液:液體100mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體30mL×1瓶,4保存;

注意事項:

臨用前注意試劑一是否wan全溶解,如未溶解,可以70-90加熱,并振蕩以促進溶解。

 

MDA提取:

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

 

測定步驟:

1、吸取0.3mL 試劑一1.5mL離心管中,再加入0.1mL樣本, 混勻。

295水浴中保溫30min(蓋緊,防止水分散失),置于冰浴中冷卻,10000g25℃,離心10min

3、吸取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中,測定532nm600nm處的吸光度,記為A532A600ΔA= A532-A600

 

MDA含量計算:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清(漿)中MDA含量的計算:

MDA含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V=25.8×ΔA

2、細菌、細胞或動物組織中MDA含量計算

1)按照蛋白濃度計算

MDA含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V)=25.8× ΔA ÷Cpr

需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

2)按照樣品質量計算

MDA含量(nmol/g 鮮重)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109(W ×V÷V樣總)=25.8×ΔA ÷W

 (3 ) 按照細菌或細胞密度計算:

MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109(500×V÷V樣總)=0.0516×ΔA

V反總:反應體系總體積, 4×10-4 Lε:丙二醛摩爾消光系數,155×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.1 mLV樣總:加入提取液體積,1 mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g500:細胞或細菌總數,500萬。

 

b.96孔板測定的計算公式如下

1、血清(漿)中MDA含量的計算:

MDA含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V=51.6×ΔA

2、細菌、細胞或動物組織中MDA含量計算

1)按照蛋白濃度計算

MDA含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V)=51.6×ΔA÷Cpr

需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

2)按照樣品質量計算

MDA含量(nmol/g 鮮重)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109(W ×V÷V樣總)=51.6×ΔA÷W

 (3 ) 按照細菌或細胞密度計算:

MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109(500×V÷V樣總)=0.1032×ΔA

V反總:反應體系總體積,4×10-4 Lε:丙二醛摩爾消光系數,155×103 L / mol /cmd96孔板光徑,0.5cmV樣:加入樣本體積,0.1 mLV樣總:加入提取液體積,1 mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g500:細胞或細菌總數,500萬。

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優利科(上海)生命科學有限公司

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