植物類黃酮（Flavonoid）試劑盒說明書
微量法100管/96樣
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
類黃酮是一類多苯化合物，屬于植物次生代謝物，對人體具有消炎，抗菌，降血脂，清除體內羥自由基，預防癌癥等作用。
測定原理：
在堿性亞硝酸鹽溶液中，類黃酮與鋁離子形成在510nm處有特征吸收峰的紅色絡合物，測定樣品提取液在510nm處的吸光值，即可計算樣品類黃酮含量。
自備實驗用品及儀器：
天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：60%乙醇，自備。
試劑一：液體1mL×1管，4℃保存。
試劑二：液體1mL×1管，4℃保存。
試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。
類黃酮提取：
將樣本烘干至恒重，粉碎，過40目篩之后，稱取約0.02g，加入2mL提取液，60℃振蕩提取2h，10000g，25℃，離心10min，取上清待測。
測定操作表：
1、 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長至510nm，蒸餾水調零。
2、 操作表
空白管 | 測定管 | |
樣本待測液（µL） | 108 | |
蒸餾水（µL） | 108 | |
試劑一（µL） | 6 | 6 |
混勻，25℃靜置6min | ||
試劑二（µL） | 6 | 6 |
混勻，25℃靜置6min | ||
試劑三（µL） | 80 | 80 |
混勻，25℃靜置15 min，測定510nm處吸光值。ΔA=A測定-A空白，空白管只要做一管。 | ||
類黃酮含量計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 5.02x+0.0007，R2 = 0.9996
類黃酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷5.02÷(W÷V樣總)= 0.398×（ΔA -0.0007）÷W
V樣總：加入提取液體積，2.5mL； V樣：反應中樣品體積，0.108mL； W：樣品質量，g
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 2.51x+0.0007，R2 = 0.9996
類黃酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷2.51÷(W÷V樣總)= 0.797×（ΔA -0.0007）÷W
V樣總：加入提取液體積，2mL；V樣：反應中樣品體積，0.108mL；W：樣品質量，g
Z低檢出限為10µg/g。
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