硫氧還蛋白過氧化物酶（TPX）活性測定試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注 意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
TPX 屬于過氧化物酶家族，在體內主要通過還原過氧化氫和一些氫過氧化物來實現抗氧化作用，功能與 GPX 類似，也是谷胱甘肽氧化還原循環關鍵酶之一。TPX 普遍存在于各種生物體內，如酵母、植物、動物、原生動物、寄生蟲、細菌和古細菌，在進化上高度保守。 TPX 與細胞增殖、分化、細胞凋亡及腫瘤發生調控密切相關。TPX 的主要功能包括細胞脫毒、抗氧化和調節由過氧化氫介導的信號轉導和免疫反應。
測定原理：
TPX 催化 H2O2 氧化二硫蘇糖醇（DTT），H2O2 的吸收波長為 240nm，通過測定 240nm 吸光度的下降速率，即可計算出 TPX 活性。
自備儀器和用品:
低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板（UV板）、和蒸餾水
試劑組成和配制:
試劑一：液體 120mL×1 瓶，室溫保存。
試劑二：液體 20mL×1 瓶，- 20℃保存。
試劑三：液體 2mL×1 支，4℃。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
TPX 測定操作：
取微量石英比色皿或 96 孔板，加入 4 μL 上清液，180 μL 試劑二，16 μL 試劑三，迅速混勻后于 240 nm 測定 10s 和 130s 吸光度，記為 A1 和 A2。
TPX 活性計算公式：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol H2O2 降解為 1 個酶活單位。TPX（nmol/min /mg prot）=(A1－A2)÷ε÷d×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷T
=573×(A1－A2)÷Cpr
(2). 按樣本質量計算
活性單位定義：25℃或者 37℃中，每克樣本每分鐘催化 1nmol H2O2 降解為 1 個酶活單位。 TPX 活性（nmol/min/g 鮮重）=(A1－A2)÷ε÷d×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T
=573×(A1－A2)÷W
（3）按細胞數量計算
活性單位定義：25℃或者 37℃中，每 104 個細胞每分鐘催化 1nmol H2O2 降解為 1 個酶活單位。
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