尿酸（Uric Acid, UA）含量測定試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注 意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
UA 是鳥類和爬行類動物的主要代謝產(chǎn)物，正常人體尿液中產(chǎn)物主要為尿素，含少量尿酸。此外，UA 還是重要的抗氧化劑，能清除超氧化物，羥自由基等。體內 UA 生成量和排泄量不平衡會導致多種疾病的發(fā)生。例如，血中 UA 升高會引起痛風、腎功能損害和動脈硬化，相反 UA 降低會引起惡性貧血，在臨床診斷上具有重要的意義。
測定原理：
尿酸酶能催化 UA 生成尿囊素，CO2 及 H2O2，H2O2 氧化亞鐵氰hua鉀中的 Fe2+ 生成 Fe3+ ，F(xiàn)e3+進一步與酚和 4-氨基安替比林縮合生成紅色醌類化合物，在 505nm 下有特征吸收峰，測定反應體系 505nm 的吸收值，可計算尿酸的含量。
自備實驗用品及儀器：
恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
緩沖液：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：
A：用于標準管和測定管，粉劑 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 13mL 緩沖液溶解。
B：用于空白管，粉劑 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 7 mL 緩沖液溶解。
試劑二：粉劑 1 管，4℃避光保存，使用前加 2mL 蒸餾水溶解，60℃加熱溶解。
樣品的制備：
1. 動植物組織：建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 生理鹽水或蒸餾水，進行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2. 血清，培養(yǎng)液：直接檢測。
測定操作表：
1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 505nm。
2、 操作表
標準管 | 空白管 | 測定管 | |
試劑一（μL） | A, 60 | B, 60 | A, 60 |
H2O（μL） | 180 | 240 | 180 |
試劑二（μL） | 60 | ||
樣品（μL） | 60 | ||
混勻，37℃水浴 30min，取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中，測定 505nm 處各管吸光值，標準管和空白管只需做一管。
UV 含量計算公式：
1. 組織：
（1）按樣本重量計算
尿酸含量（μmol/g 鮮重）=C 標準品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）÷（W÷V樣總）=0.5×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
尿酸含量（μmol/mg prot）=C 標準品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）÷ Cpr =0.5×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）÷Cpr
尿酸（μmol/L）= C 標準品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）×103 =500×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）
C 標：標準品濃度 0.5μmol/mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質量，g ；Cpr：
樣本蛋白濃度，mg/mL；103 ：1μmol/ L=103μmol/ mL
注意事項：
1. 血清樣本請在 24 小時內測定，或者 4℃密封避光保存不超過 72 小時。
2. 吸光值大于 0.8 可用蒸餾水稀釋樣本，并在計算公式中算入稀釋倍數(shù)。
3. z低檢出限為 10μmol/L。
3
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務