植物總酚(Total Phenols,TP)試劑盒說明書
微量法100T/48S
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
植物酚類物質具有清除自由基,抗氧化抗衰老的作用,具有較高的營養價值和醫療保健作用而廣泛應用于化妝品、食品、醫藥等領域。
測定原理:
在堿性條件下,酚類物質將鎢鉬酸還原,產生藍色化合物,在760nm處有特征吸收峰,測760nm處的吸光值,即可得樣品總酚含量。
自備實驗用品及儀器:
天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:60%乙醇,自備。
試劑一:液體3mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體5mL×1瓶,4℃保存。
總酚提取:
直接檢測
測定操作表:
1、 分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至760nm,蒸餾水調零。
2、 操作表
對照管 | 測定管 | |
樣本待測液(µL) | 10 | 10 |
試劑一(µL) | 50 | |
混勻,25℃靜置2min | ||
試劑二(µL) | 50 | 50 |
H2O(µL) | 140 | 90 |
混勻,25℃靜置10 min,于微量石英比色皿/96孔板中,測定760nm吸光值,ΔA=A測定-A對照。 |
總酚含量計算公式:
標準曲線:y = 2.808x+0.0012,R2 = 0.9994
總酚含量(mg/g 干重)=(ΔA-0.0012 )÷2.808
= 0.356×(ΔA–0.0012 )
注意事項:
1. 吸光值大于2,樣品適當稀釋再測定,注意計算公式里乘以稀釋倍數。
2. 試劑一對皮膚有一定的刺激性,請操作時做好防護措施。
3. Z低檢出限為2.4 μg/g。
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