目錄:優利科(上海)生命科學有限公司>>科研細胞>>細胞系>> 復蘇/凍存NCI-N87+luc 人胃癌細胞熒光素酶標記
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 |
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貨號 | YLK-XB1619h | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | NCI-N87+luc |
NCI-N87+luc 人胃癌細胞熒光素酶標記
細胞特性:
1) 來源:胃癌,肝轉移
2) 形態:上皮細胞樣,貼壁生長
3) 含量:>1x10^6 細胞數
4) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
細胞篩選
該細胞為穩定轉染Luc的細胞,隨細胞傳代次數的增加,其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。
建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。
初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完培維持培養,若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完培繼續篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養基培養,至細胞密度約80%,可繼續加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完培正常培養。
運輸和保存:
干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的注意事項:
1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完培6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完培來培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備1640 基礎培養基 87 %
優質胎牛血清 10 %
P/S青霉/素-鏈霉/素 1%
GlutaMAX-1谷氨/酰胺 1%
Sodium Pyruvate丙酮酸鈉 1%
注意事項:該細胞貼壁較慢,且生長緩慢,建議復蘇、傳代后讓細胞貼壁48h后再進行后續實驗操作。細胞最初將附著形成小島狀,然后在這些密集的斑塊中增殖,因此很難正確估計匯合度。避免細胞過密生長,及時更換新鮮培養基,以免培養基的pH受到不利影響。該細胞培養時,在培養基中會有一些漂浮細胞和碎片,并且在該細胞中可能會觀察到較大的“囊泡"和顆粒狀外觀,是正常現象。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
細胞處理:
1) 凍存細胞的復蘇:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完培重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
NCI-N87+luc 人胃癌細胞熒光素酶標記
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