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RAW264.7+GFP 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞綠色熒光標記

細胞特性：

1） 來源：鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞

2） 形態：不規則圓形，紡錘狀，貼壁細胞，少量懸浮。

3） 含量：>1x10^6  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

運輸和保存：

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的注意事項：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完培6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完培來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。

培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備DMEM(包含2mM L-谷氨/酰胺，0.11g / L丙酮酸鈉)培養基；優質胎牛血清10 %；P/S青霉/素-鏈霉/素 1%。

2） 注意事項：

（a）在細胞生長的初始階段，細胞以貼壁的形式生長并呈現出長方體的形態和有“偽足"延伸。隨著培養時間的增加，細胞呈現圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度，會有細胞以懸浮的方式散落到到培養基中，鏡下觀察會發現懸浮和貼壁的細胞會同時出現。

（b）該細胞傳代時不需要用胰/酶消化。傳代時，用無菌細胞刮刮拭培養表面將細胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養瓶中。（c）該細胞形態上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應收集起來，離心后細胞沉淀可以繼續培養。

（d）血清質量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應選用高質量的胎牛血清。

3） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完培重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

RAW264.7+GFP 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞綠色熒光標記

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