首頁 >> 供求商機
【產品名稱】
通用名稱：炭疽桿菌 pagA、cap、rpoB 基因（BaP/C/R）檢測試劑盒(三重熒光 PCR 法)
Name：Bacillus Anthracis pagA、cap、rpoB gene Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規格】 50T/盒
【預期用途】 炭疽是由炭疽桿菌（Bacillus Anthracis, BA）感染引起的一種人獸共患病。BA 在極-端環境中形成芽孢，可長期、穩定地存在于自然界中。由于 BA 的穩定性及其致病性，易引發突發公共衛生事件。目前的 BA 檢測方法主 要基于病原體的培養、染色鏡檢、血清學檢測等，但這些方法均不適合早期的快速偵檢。基于核酸檢測的熒光-PCR 技術，因其靈敏度高、操作簡單、特異性好，可快速檢測炭疽病原，及時控制炭疽疫情。 本試劑盒采用探針法實時熒光定量 PCR 技術，用于水皰內容物、病灶滲出物、分泌物、痰液、嘔吐物、 糞便、血液、腦脊液以及增菌液中炭疽桿菌的定性檢測。
【檢驗原理】 本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術，對炭疽桿菌的 pagA、cap、rpoB 的基因分別設計特異性 引物和特異性探針，用熒光 PCR 技術對炭疽桿菌的 DNA 進行體外擴增檢測，用于對可疑感染者的病原學診斷。
【試劑組成】 包裝規格 50T/盒 BaP/C/R 反應液 500μL×2 管 酶液 50μL×1 管 BaP/C/R 陽性質控品 50μL ×1 管 陰性質控品 250μL ×1 管 說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不超過 5 次，有效期 12 個月。
【適用儀器】 ABI、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】 炭疽水皰內容物、炭疽病灶滲出物、分泌物、痰液、嘔吐物、糞便、血液、腦脊液等；
【保存和運輸】 上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸， 嚴禁反復凍融。 【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區）
1.1 樣本前處理 組織樣品：每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g，手術-剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加 入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 200μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；咽拭-子樣品直接取 200μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
1.2 核酸提取 推薦采用優利科（上海）生命科學有限公司生產的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提 取，請按照試劑說明書進行操作。
2. 試劑配制（試劑準備區） 根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性質控品+1 管陽性質控品)，每 測試反應體系配制如下表： 試劑 BaP/C/R 反應液 酶液 用量（樣本數為 N） 20μL 1μL 將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，21μL/管。
3. 加樣（樣本處理區） 將步驟 1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。 4. PCR 擴增（核酸擴增區）
4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL； 熒光通道選擇：檢測通道（Reporter Dye）FAM，Cy5，TXR， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀 器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。
4.3推薦循環參數設置： 步驟 循環數 溫度 時間 收集熒光信號 1 1 cycle 95℃ 10min 否 2 40 cycles 94℃ 15sec 否 55℃ 30sec 是
5. 結果分析判定
5.1 結果分析條件設定 設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像 調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性質控品)，重新分析結果。
5.2 結果判斷 FAM 通道為 pagA 基因檢測結果，Cy5 通道為 cap 基因檢測結果，TXR 通道為 rpoB 檢測結果； 陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線； 可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38，且曲線有明顯的增長曲線， 判定為陽性，否則為陰性； 陰性：樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
6. 質控標準 陰性質控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示； 陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
7. 檢測方法的局限性
1.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；
2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；
3.陽性質控品、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；
4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；
7.本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項】
1.所有操作嚴格按照說明書進行；
2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，*混勻并短暫離心；
3.反應液應避光保存；
4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。
3