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大鼠膠原吡啶交聯(PYD)免疫組化試劑盒
該試劑盒以HRP標記的鏈霉親和素復合物(HRP Streptavidin Conjugate,HRP-SA)為基礎,可用于檢測細胞、組織內的特異性膠原吡啶交聯(PYD)抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的膠原吡啶交聯(PYD)一抗與相應靶抗原結合后,用生物化二抗與一抗特異性結合,最后加入HRP-SA,形成抗原—特異一抗—生物素化二抗—HRP-SA復合物,顯微鏡下觀察成像。
試劑盒所含試劑:
試劑A 通透液:0.1% Triton-X 100 10 mL(選用)
試劑B 封閉緩沖液(封閉用) 20 mL
試劑C (原裝-進口分裝)已稀釋的即用型膠原吡啶交聯(PYD)一抗(2.5ml)
試劑D (原裝-進口分裝)生物素化羊抗兔IgG 1支
(濃度1.5 mg/mL,稀釋比為1:300~1:500)50 μL+抗體稀釋液20ml
試劑E HRP-SA復合物1支(濃度1 μM,稀釋比1:50~1:200)100 μL
試劑F DAB顯色液 5ml
用戶自備試劑:
1. 10mM TBS(pH7.2~7.4)
三羥基氨基甲烷1.21g
氯化鈉7.6g
加蒸餾水800mL,濃鹽酸調pH值至7.2~7.4,最后定容至1000mL
TBS-T:TBS+Tween 20(0.05%體積比)
2.抗原修復液(依檢測抗原不同而選擇不同的修復液)
10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液
檸檬酸0.38g
檸檬酸三鈉2.45g
加蒸餾水900mL,濃鹽酸調pH值至6.0,最后定容至1000mL
或:0.5M EDTA修復液(pH8.0)
EDTA·2H2O 186.1g
檸檬酸三鈉2.45g
加蒸餾水700mL,用10mM NaOH調pH值至8.0,最后定容至1000Ml
3. 緩沖甘油封固劑10 mL
4. Tween 20 5 mL
注意事項:
1. 修復后緩沖液須自然冷卻,自來水沖洗后方能把切片取出,驟冷有可能導致結晶或抗原封閉。
2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到,用過的檸檬酸緩沖液不能反復使用。
3. 若試劑為微量濃縮液,用前應低速離心,將內蓋和管壁附著的溶液離到底部。
4. 封片前一定要換用TBS充分洗滌,以便洗去組織上殘留的Tween 20,否則會影響結果觀察。
5. 如須復染細胞核,則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封片。
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