精品亚洲a∨无码专区毛片-精品亚洲aⅴ无码午夜在线-精品亚洲aⅴ无码午夜在线观看-精品亚洲aⅴ无码一区二区三区-精品亚洲aⅴ无码专区毛片-精品亚洲aⅴ在线

中文名稱(chēng)：?jiǎn)渭?xì)胞裂解液 (DNA型)

英文名稱(chēng)：Single Cell Lysis Solution（DNA）

產(chǎn)品及特點(diǎn)

單細(xì)胞裂解液（DNA 專(zhuān)用）是單細(xì)胞DNA 提取專(zhuān)用裂解液，產(chǎn)品經(jīng)過(guò)多次優(yōu)化，含有多種去污劑、變性劑和鹽，可有效抑制核酸酶在裂解過(guò)程中對(duì)核酸的破壞，維持核酸的穩(wěn)定性。單細(xì)胞裂解物可以直接用于測(cè)序和RT-PCR 等試驗(yàn)。本產(chǎn)品足夠使用 200 次以上。

規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

自備試劑

PBS 溶液

使用方法

如何制備單個(gè)細(xì)胞取決于實(shí)驗(yàn)樣品和實(shí)驗(yàn)者所擁有的儀器設(shè)備，此處所列步驟僅針對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞、實(shí)體組織、淋巴細(xì)胞和卵裂球（2-8 細(xì)胞胚胎）等材料，對(duì)其他材料（如干細(xì)胞克隆、胚囊、胚胎組織等），用戶需自行選用合適的方法制備單細(xì)胞。對(duì)已經(jīng)處于單細(xì)胞懸浮狀態(tài)的細(xì)胞（如 FACS 分離細(xì)胞、卵細(xì)胞等），則可以跳過(guò)制備過(guò)程而直接進(jìn)入單細(xì)胞裂解步驟：

一、用培養(yǎng)細(xì)胞或?qū)嶓w組織制備單細(xì)胞：

1.    按常規(guī)胰酶方法處理培養(yǎng)細(xì)胞或組織，將細(xì)胞重懸于自備的液體細(xì)胞培養(yǎng)基中。

2.    按常規(guī)方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

3.    轉(zhuǎn)移 100-4000 個(gè)細(xì)胞到新離心管中，400 g 離心 4 分鐘沉淀細(xì)胞，小心棄上清（培養(yǎng)基）。

4.    將細(xì)胞沉淀重懸于 50 uL 自備的 PBS 溶液中，使其終濃度為 2-80 個(gè)細(xì)胞/uL。

5.    在干凈的培養(yǎng)皿上點(diǎn)加數(shù)個(gè)含 5 uL PBS 溶液的小液滴，加入 5 uL 細(xì)胞懸浮液到第一個(gè)小液滴中，然后再?gòu)牡谝粋€(gè)小液滴中轉(zhuǎn)移 5 uL 到第二個(gè)小液滴，如此系列稀釋樣品數(shù)次，使得其濃度接近每 2.5 uL 液體中含 1 個(gè)細(xì)胞，放冰上待用。

二、用卵裂球（blastomere，2-8 細(xì)胞胚胎）制備單個(gè)細(xì)胞：

6.    在培養(yǎng)皿中點(diǎn)數(shù)個(gè)含 5 uL 胚胎裂解液（需要從本公司另購(gòu)）的小液滴。

顯微鏡下用微量注射液加入一個(gè)卵裂球到一個(gè)胚胎裂解液小液滴中。

8.    轉(zhuǎn)移幾次到后面的幾個(gè)液滴中以便將帶入的培養(yǎng)基稀釋掉。

9.    在最后一個(gè)液滴中，卵裂球的幾個(gè)細(xì)胞將彼此分開(kāi)成單個(gè)細(xì)胞。

10.  取單個(gè)細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到數(shù)個(gè)含 5 uL PBS 溶液的小液滴中洗滌掉胚胎裂解液。

11.  在顯微鏡下用顯微注射儀取只含一個(gè)細(xì)胞的 2.5 uL 樣品并轉(zhuǎn)移到一個(gè)200 uL 的PCR 管中待用。同時(shí)設(shè)置無(wú)樣品的陰性對(duì)照（2.5 uL 樣品中不含細(xì)胞）。

三、用單細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞

12.  在顯微鏡下用顯微注射儀取 2.5 uL 樣品，確認(rèn)含一個(gè)細(xì)胞后，將其轉(zhuǎn)移到一個(gè)含 2.5 uL 單細(xì)胞裂解液的PCR 管中。最好同時(shí)設(shè)置無(wú)樣品的陰性對(duì)照（2.5 uL 樣品中不含細(xì)胞）。

13.  在 2.5 uL 樣品中，顯微鏡下細(xì)胞懸液可直接用于單細(xì)胞裂解反應(yīng)。

14.  裂解后可以放冰上待用，如果長(zhǎng)期不用，可以放-80℃保存。四、單細(xì)胞裂解物的PCR 擴(kuò)增

15.  細(xì)胞裂解物從-80℃中取出后，65℃保溫 10 分鐘，取出后放冰上待用。

16.  以一半或全部上步操作得到的細(xì)胞裂解物為模板，按常規(guī)方法進(jìn)行 PCR

反應(yīng)。