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293T 人胚腎細(xì)胞

規(guī)格: a T25 flask

生長特性：貼壁（貼壁較弱，發(fā)貨易漂浮聚集，是正常現(xiàn)象，按要求處理后可以恢復(fù)正常狀態(tài)）

生長培養(yǎng)基: H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)條件: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components 

細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

1. 吸走多余培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞；

2. 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰-酶浸沒細(xì)胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；
        （細(xì)胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細(xì)胞*漂浮。混勻細(xì)胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）

3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細(xì)胞混勻；

4. 將混勻的細(xì)胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)(建議T25瓶加10-12ml*培養(yǎng)基，10cm皿加12-15ml)；

傳代比例: 不同細(xì)胞生長速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長速度而定，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。

細(xì)胞冷凍保存

1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。

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