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T2毒素檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
  • T2毒素檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
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貨物所在地:上海上海市

地: 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

更新時(shí)間:2024-03-03 10:56:50

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T2毒素(T2)是由多種鐮刀菌產(chǎn)生的一種霉菌毒素。主要污染小麥、大麥、玉米等糧食作物及其制品,對(duì)人類(lèi)健康及畜牧業(yè)構(gòu)成了較大危害。T2毒素主要影響血液,肝臟,腎臟,胰腺肌肉及淋巴細(xì)胞的功能,T2毒素中毒后的一般臨床癥狀為厭食、嘔吐、腹瀉、生長(zhǎng)停滯、繁殖和神經(jīng)機(jī)能障礙等。使用T2毒素檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣品中T2毒素殘留。

T2毒素檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

1 原理及用途

T2毒素(T2)是由多種鐮刀菌產(chǎn)生的一種霉菌毒素。主要污染小麥、大麥、玉米等糧食作物及其制品,對(duì)人類(lèi)健康及畜牧業(yè)構(gòu)成了較大危害。T2毒素主要影響血液,肝臟,腎臟,胰腺肌肉及淋巴細(xì)胞的功能,T2毒素中毒后的一般臨床癥狀為厭食、嘔吐、腹瀉、生長(zhǎng)停滯、繁殖和神經(jīng)機(jī)能障礙等。使用T2毒素試劑盒則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣品中T2毒素殘留。

本試劑盒采用一步競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)玉米、大米、豆類(lèi)、花生、燕麥、飼料等樣本中的T2毒素,試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被T2毒素抗原與樣本中T2毒素競(jìng)爭(zhēng)抗T2毒素抗體(抗體工作液),同時(shí)抗T2毒素抗體與酶標(biāo)二抗(酶標(biāo)記物)相結(jié)合,經(jīng)TMB底物顯色,樣本吸光值與其含有的T2毒素成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中T2毒素的含量。

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度:0.05ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min~15min

2.3 檢測(cè)下限:

花生、玉米、燕麥、大豆、飼料等……………6ppb

2.5 樣本回收率:

花生、玉米、燕麥、大豆、飼料等……………110±15%

3 試劑盒組成

酶標(biāo)板……………………………96孔

濃縮標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):各1ml

0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb

酶標(biāo)記物………………………………6ml

抗體工作液……………………………6ml

底物液A(白蓋)……………………6ml

底物液B(黑蓋)……………………6ml

終止液(黃蓋)………………………6ml

20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml

說(shuō)明書(shū)…………………………………1份

蓋板膜…………………………………1張

自封袋…………………………………1個(gè)


4 需要的器材和試劑

4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、漏斗、濾紙

4.2 微量移液器:?jiǎn)蔚?0µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl

4.3 試劑:甲醇、去離子水

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知:

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液:

配液1:樣品提取液

用去離子水將甲醇按3∶2體積比進(jìn)行稀釋?zhuān)ɡ?0ml甲醇+20ml去離子水)。

配液2:工作洗滌液

將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。

5.3.1 花生、玉米、燕麥、大豆、飼料等樣品處理方法

1)取1g粉碎樣品,加入20ml樣品提取液;

2)劇烈振蕩5min;

3)室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘(或用定量分析濾紙過(guò)濾);

4)取上清液,用蒸餾水或去離子水按1∶5(即:取1份上清液+5份去離子水)比例稀釋?zhuān)?/p>

5)取50μl進(jìn)行分析。

稀釋倍數(shù):120         檢測(cè)下限:6ppb

6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。

6.1 編    號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘。

6.3 洗    滌:小心揭開(kāi)蓋板膜,甩去孔內(nèi)液體,每孔加350ul工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

6.4 顯    色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘(若藍(lán)色過(guò)淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間)。

6.5 終    止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。

6.6 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。


7 結(jié)果分析

7.1 百分吸光率的計(jì)算

標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光度值(%)=A×100%
A0

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來(lái)電索取)

8 注意事項(xiàng)

8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

8.2 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性。

8.4 在所有孵育過(guò)程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。

8.5 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。

8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。

9 貯藏及保存期

儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。

保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。




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