細胞培養,是人工創造與體內生長相似的環境,使細胞生長、繁殖并維持主要結構和功能的技術。培養基是一切體外培養的基礎,為細胞的生長和代謝活動提供了各種必需的營養物質。根據培養基的來源和組成成分,它的發展經歷了三個階段,分別是天然培養基階段、合成培養基階段以及無血清培養基階段。那么你知道什么是液體培養基嗎?它的組分是什么嗎?讓我們一起來看看吧!
在20世紀50年代,當時體外培養普遍直接采用組織凝塊、生物性液體和組織提取液,如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸液等,這就是天然培養基階段。由于天然培養基的使用會帶來不可避免的病毒污染、批次間差異大等問題,于是就有了合成培養基,其主要成分包括生長因子、營養物質、緩沖劑、抗生素等。合成培養基最初的配方是MEM,由Eagle在1959年shou次提出,之后經過不斷發展涌出了各種不同配方的優質合成培養基,包括M199、DMEM、IMDM、PRMI1640等,這些經典培養基到現在依舊是實驗室中應用zui廣泛的。
按照物理性質可將其分為:液體培養基、固體培養基、半固體培養基、脫水培養基。其中,液體培養基最為常見,它具有可進行通氣培養或振蕩培養的優勢,因為它的流動性便于精確控制培養基的溶液溫度、營養濃度和氣體含量等;它對細胞生長時的附著能力要求小,細胞可快速擴增;當需要大量細胞培養時也更經濟高效。作為大家使用最為頻繁的細胞培養試劑,基礎液體培養基在細胞培養中起到關鍵作用。
基礎液體培養基的組分
為了滿足細胞的生長需要,液體培養基一般都會含有水、能源物質、氨基酸、維生素、無機鹽和pH指示劑等。此外,還可能含有血清或血清替代成分。
(1)水
液體細胞培養基中90 %以上的成份是水。細胞對水的品質非常敏感,水的品質將直接影響細胞培養的效果。因此,細胞培養用水須經過純化,品質應符合中國藥典注射用水標準或者超純水的標準。
(2)能源物質
液體培養基的能源物質以葡萄糖為主,少數含有半乳糖、果糖、甘露糖等。根據葡萄糖含量不同區分,代謝消耗較快的病理狀態細胞多選用高糖(4.5 g/L)培養基,單抗細胞融合時使用低糖(1.0 g/L)培養基。當葡萄糖不足時,可以使用丙酮酸鈉為細胞提供碳源,并且部分細胞系對丙酮酸鈉具有依賴性。
(3)氨基酸
氨基酸是蛋白質合成的基礎,不同細胞需要的氨基酸類型具有差異性。谷氨酰胺是一種氨基酸,也是一種重要能源物質,但要注意它在溶液中不穩定,代謝產物會損傷敏感細胞系。
(4)維生素
維生素參與酶構成,是維持細胞生長的生物活性物質,在細胞代謝中起調節及控制作用。
(5)無機鹽
無機鹽的主要作用就是維持滲透壓平衡,調節pH。
(6)緩沖體系
細胞培養過程中造成培養基 pH 波動的主要物質是細胞代謝產生的CO2,液體培養基通常采用NaHCO3或HEPES緩沖體系來為細胞生長提供穩定的pH環境。
(7)酚紅:酸堿指示劑。
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