流式細胞術的測定對象是單細胞或單個微粒,在FCM技術中能夠制備出合格的單細胞懸液是非常重要的環節,單細胞懸液來自于動植物的不同組織器官,也可來自于非生物樣品,FCM中大多數為生物樣品,生物樣品主要來源于培養細胞、血液、新鮮實體組織以及石蠟包埋組織等,不同的組織有不同的單細胞分散方法,因此建立切實可行的FCM單細胞懸液的具體制備方法,在流式細胞分析中至關重要。那么你知道流式細胞術的樣品制備方法有什么嗎?讓我們一起來看看吧!
一、酶消化法
酶的作用原理主要有三方面:一是破壞組織間的膠原纖維、彈性纖維等,二是水解組織細胞的緊密連接結構的蛋白質,三是水解組織間的粘多糖物質。酶消化法是實體組織分散為單細胞的主要方法之一。
二、機械法
機械法分散實體組織包括:用剪刀剪碎組織或用鋒利的解剖刀剁碎組織,用勻漿器勻漿,用細注射針頭反復抽吸細胞等,最后用300目尼龍網過濾細胞得到單細胞懸液。
三、化學處理法
化學處理法的主要原理是:將組織細胞間起粘連作用的鈣、鎂離子置換出來,從而使細胞分散下來。
四、石蠟包埋組織單細胞懸液制備
石蠟包埋組織單細胞懸液的制作方法的建立擴大了流式細胞術的應用范圍,并有大量臨床隨訪資料,因此非常有利于進行回顧性研究和利用。下面介紹常用石蠟包埋組織單細胞懸液制備方法。
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