你知道抗體的保存條件都有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!
一、抗體的穩定性
抗體是免疫系統中最重要的分子之一,其穩定性是自然進化篩選的結果。在眾多物種中,抗體分子形成了保守而穩定的結構,分子中70% 氨基酸殘基(免疫球蛋白結構域)以beta片層(beta-sheet)形式堆疊,形成緊密并能耐受蛋白酶作用的“三明治"結構,輕鏈和重鏈通過保守的二硫鍵形成具有三個結構域的免疫球蛋白,大大提高了分子本身的穩定性。
抗體主要涉及化學或物理不穩定性。化學不穩定性是指多肽或蛋白質結構內共價鍵的形成或破壞。蛋白質化學失活機制主要包括聚合作用、重要氨基酸的變化,如肽鍵在稀酸條件下被水解;半胱氨酸、色氨酸、甲硫氨酸的氧化;二硫鍵的還原;用金屬離子修飾巰基形成硫醇鹽;天冬酰胺與谷氨酰胺的脫酰胺;氨基酸消旋,寡聚蛋白解聚成單體等。而抗體結構的展開、解離、變性、聚集和沉淀被稱為構象或物理不穩定性。
zhong所周知,儲存條件(pH值、緩沖液類型、穩定劑、防腐劑、蛋白酶抑制劑、溫度和反復解凍)在抗體穩定性中起著至關重要的作用。
二、保存溫度
每種樣品均有其穩定的溫度范圍,溫度升高會引起許多物理和化學變化,如溫度升高10℃,氧化反應約加快數倍,酶促反應約增加1-3倍;又如多數蛋白在60℃以上開始變性,熱變性通常是不可逆的,不利于物質的穩定存在。另外,適宜的溫度(如室溫)又是微生物污染的重要條件。而低溫卻可以抑制氧化、水解等化學反應及微生物生長,使微生物處于生命遲緩和隱蔽狀態。故大多數生化樣品選擇低溫保存,其穩定性可大大增加。
通常蛋白質短期在4℃中儲存穩定,不穩定的蛋白質應儲存在-20℃,而極不穩定的蛋白質存儲在-70℃。然而在冷凍過程中會產生大量的小冰晶,形成更大的冰-水界面表面積,冰-水表面面積的增加與蛋白質構象的變化和蛋白質聚集的增加有關,因此需要避免反復凍融。
凍干粉抗體,穩定性高,可在-20℃、-80℃條件中長時間保存(長達數年),4℃環境也較為穩定。權衡各種因素,凍干粉抗體一般保存在-20℃,取用方便,保存時間長。粉末狀抗體溶解后即變成液體狀態抗體,保存條件發生變化。需要按照說明書或者液體抗體保存方法(最好分裝)。
三、蛋白質保存濃度
通常蛋白質的濃度也是影響穩定性重要因素,一般蛋白質在高濃度(1 mg/ml或者更高)溶液中比較穩定,不容易降解,因為液態蛋白質容易受水化作用的影響,保存時濃度不能太低,否則可能引起亞基蛋白和輔助因子解離,會導致結構松散,穩定性下降而易于失活。
因此部分抗體試劑中加入了牛血清白蛋白(BSA)作為蛋白質穩定劑來防止降解。加入BSA能夠抑制冷凍引起的蛋白質去折疊,通過增加蛋白質的起始濃度,能夠增強在凍融過程中蛋白質制備物對損傷的耐受性。當蛋白質的起始濃度增高時,抗體變性的百分比也會下降。另一方面,加入的蛋白還能盡可能減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。
當抗體稀釋至工作濃度后,應當及時使用,在4℃盡量不要超過1天。
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