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質粒轉染的操作步驟

閱讀:1129      發布時間:2023-12-18
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  質粒轉染的操作步驟
 
  轉染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。質粒轉染對于哺乳細胞蛋白的表達至關重要,轉染的方法和步驟直接影響著轉染的成功與否。那么你知道質粒轉染的操作步驟有那些嗎?讓我們一起來看看吧!
 
  以24孔板培養的哺乳動物細胞為例:
 
  一、種細胞;
 
  1. 貼壁細胞:轉染前一天每孔0.5-2×10E5個細胞接種于500ul培養基中,在轉染時細胞可長至90-95%匯合度。
 
  2. 懸浮細胞:在配置轉染液前每孔4-8×10E5個細胞接種于500ul培養基中。
 
  二、轉染液配置,每孔細胞用量如下:
 
  1. 用50ul無血清培養基稀釋質粒DNA,輕輕混勻。
 
  2. 取適量合適的質粒轉染試劑在50ul無血清培養基中稀釋,室溫孵育5min。
 
  3. 將前兩步所稀釋的DNA和質粒轉染試劑混合,輕輕混勻,室溫放置30min。
 
  三、在每孔細胞中加入混合后的轉染液,輕輕搖勻。
 
  四、貼壁細胞可在轉染4-6h后更換培養基,懸浮細胞可在轉染后18-48h間進行細胞換液,轉染18-48h后可檢測基因mRNA水平表達。如果檢測蛋白表達,需在轉染后48-72h收集細胞樣品。
 
  五、對于穩定轉染,在轉染24h后以1:10傳代培養,第二天可加入選擇培養基。
 
  更多有關質粒轉染的操作步驟,請聯系天津益元利康生物科技有限公司。

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