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供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 食品,化工,生物產業,農業,制藥 |
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低因子基質膠-含酚紅
貨號:MG2230、MG4230、MG6230
存儲條件:-80℃ 保存,避免反復凍融。
產品簡介:
基質膠是從Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性細胞培養基質,含有豐富的細胞外基質蛋白,主要包括層粘連蛋白、膠原IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以及大量的生長因子。
基底膠在室溫條件下,聚合形成具有生物學活性的三維基質,模擬體內細胞基底膜的結構、組成、物理特性和功能,有利于體外細胞的培養和分化,以及對細胞形態、生化功能、遷移、侵染和基因表達的研究。基質膠也適用于類器官生長、分化、代謝和毒理學研究。高濃度的基質膠可以用于動物體內成瘤實驗的細胞包被。
操作方法:
一、薄膠成膠方法:
1. 凍融后,用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀。
2. 將需要使用的培養板置于冰上,加入濃度為 50μL/cm2。
2 生長面積的基質膠。
3. 在 37℃放置 30 分鐘,即可使用。
二、厚膠成膠方法:
1. 凍融后,用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀。
2. 將需要使用的培養板置于冰浴,將培養的細胞與基質膠混合,用移液槍頭使其懸浮于基質中。加入濃度150-200μL/cm2 生長面積的基質膠。
3. 在37℃放置 30 分鐘,可成膠。可以加入細胞培養的基質,也可使細胞直接生長在膠表面。
三、薄層包被方法:
1. 凍融后,用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀。
2. 根據使用需要,采用無血清培養基稀釋基質膠。根據實驗需要確定最佳包被濃度。
3. 將稀釋的 基質膠包被于所需的培養器皿中,包被量至少覆蓋整個器皿的生長表面。室溫下孵育 1 小時。
4. 去除未結合的基質膠,用無血清培養基輕輕地沖洗。
四、類器官培養方法:
1. 用適量的4℃過夜解凍的基質膠重懸細胞或組織沉淀,推薦重懸密度為每 50μL基質膠懸液包含 1X10^5細胞,重懸后可置于冰上,重懸時間不超過 30s 以避免基質膠過早凝固。基質膠稀釋比例應在 70%以上以保證培養過程中基質膠的結構穩定性。
2. 將基質膠和組織細胞的混合懸液點入預熱的24 孔板底部正中央,每孔 30μL 左右,避免懸液接觸孔板側壁。為防止基質膠室溫凝固,此步驟應盡快完成。
3. 將接種完成后的培養板至于 37℃二氧化碳恒溫培養箱中,孵育 15min 左右待基質膠凝固。
4. 待基質膠wanquan凝固后,沿壁緩慢加入類器官培養基,24 孔板每孔 500uL,避免破壞已凝固結構。
5. 將 24 孔板置于 37℃二氧化碳培養箱中培養。
6. 每 3 天更換一次培養基,更換培養基時應避免破壞基質膠。
五、胚胎干細胞 ES 和誘導多能干細胞 ips 培養(推薦使用hES驗證款基質膠)
1. 在冰上解融一份分裝的基質膠。
2. 在50 mL離心管中加入24 mL的預冷的DMEM/F-12,并且放在冰上。
3. 將解融的基質膠按一定稀釋比例(如1:100)加入到預冷的 DMEM/F-12中(在50 mL離心管中),混勻。
4. 稀釋好的基質膠溶液必須立即使用,進行培養皿的包被。推薦的包被體積參見下表。
培養皿 | 稀釋后的基質體積 |
6孔培養板 | 1 mL/孔 |
10 mm培養皿 | 6 mL/培養皿 |
T-25培養瓶 | 3 mL/培養瓶 |
T-75培養瓶 | 8 mL/培養瓶 |
5. 輕輕晃動培養皿,將基質膠溶液均勻的覆蓋到培養皿的表面。
注意:如果培養皿的表面沒有被基質膠溶液wanquan覆蓋,則不能用于人ES和iPS細胞培養。
6. 培養皿使用前至少在室溫(15 - 25°C)孵育1個小時,不可使基質膠蒸發。
注意:如果不是立即使用,包被好的培養皿必須密封防止基質膠溶液的蒸發,包被后可以在2 - 8°C放置一周。在使用之前,至少在室溫(15 - 25°C)中放置30分鐘恢復到室溫。
7. 輕輕的將培養皿的一側傾斜,使多余的基質膠溶液在一側的邊緣匯聚。通過移液器或者泵吸取多余的基質膠溶液。確保包被的表面沒有被刮到。
8. 立即加入ES細胞培養基(例如,6孔板每孔2 mL)。
注意事項:
1. 收到產品并確認到貨情況無異常后,請將 基質膠儲存于--80℃冰箱,短暫使用可置于--20℃冰箱。切勿將基質膠儲存于自動除霜的冰箱中。在第一次融化后請分裝保存,應避免基質膠反復凍融。
2. 因基質膠在 10℃以上即可成膠,在操作過程中,保持基質膠一直置于冰上,所有接觸的細胞培養器皿,移液吸頭,分裝管等都必須預冷后使用。
3. 所有操作均需在無菌環境下進行,試劑瓶瓶蓋可用 70%乙醇擦拭,并自然干燥。應使用預冷的移液器以保證基質膠呈勻漿狀。
4. 溶解時可將基質膠基質置于 4℃冰箱內冰上過夜溶解。成膠后基質膠可以在 4℃ 24-48 小時后重新呈液態。