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大鼠鼓膜上皮干細胞
產品基本信息
細胞名稱：大鼠鼓膜上皮干細胞
種屬來源：大鼠
組織來源： 鼓膜
細胞形態：鋪路石狀細胞，不規則細胞樣
生長特性：貼壁生長
培養基：專用培養基
生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃
傳代方法：首傳代建議1：2傳代，1:2傳代是1個T25瓶傳2個T25瓶或2個6cm皿
質量檢測：NSE免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等
細胞培養操作
1)復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL完培養基，培養過夜)。第三天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
1.吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次;
2.添加0.25%胰蛋白mei消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余胰蛋白mei消化液，37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培養基終止消化;
3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的全培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養;
4.待細胞完貼壁后，培養觀察;之后每2-3天換液一次新鮮的完培養基。
3)細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
培養注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，干冰運輸的細胞檢查干冰是否完揮發，細胞是否解凍，若有上述現象發生請及時和我們聯系。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞亡破碎形成碎片，是正常現象。.觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置2-4h。
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的完培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。
5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。
6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完培養基來培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代 。
9. 注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。
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