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訪問次數(shù):98更新時(shí)間:2023-06-08 11:12:17
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一、呋喃唑酮代謝物檢測(cè)試劑盒概要
硝基呋喃類藥物因其具有價(jià)格便宜、抗菌效果好等特點(diǎn),曾經(jīng)被廣泛應(yīng)用,作為禽類、水產(chǎn)和豬促生長的添加劑。但在長時(shí)間的實(shí)驗(yàn)研究過程中發(fā)現(xiàn),硝基呋喃類藥物和代謝物均可以使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生癌變和基因突變,為了保證人類的食品安全,目前各國已禁止硝基呋喃類藥物作為藥物添加劑添加至動(dòng)物飼料中。
二、原理
呋喃唑酮快速檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)蜂蜜、魚、蝦、禽、肝臟等中的呋喃唑酮代謝物(AOZ),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的呋喃唑酮代謝物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗呋喃唑酮代謝物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含呋喃唑酮代謝物含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中呋喃唑酮代謝物的殘留量。
三、適用范圍
呋喃唑酮代謝物檢測(cè)試劑盒可定性、定量檢測(cè)動(dòng)物組織(雞、豬、牛、水產(chǎn)等)以及蜂蜜產(chǎn)品中呋喃唑酮代謝物的殘留量。
四、技術(shù)指標(biāo)
1 試劑盒靈敏度:0.02ppb(ng/ml)
2 反應(yīng)模式:25℃,45min~15min。
3 檢測(cè)下限:
組織、肝臟:0.04ppb 蜂蜜、牛奶、腸衣:0.04ppb
魚/蝦等水產(chǎn)品組織因有一定干擾,定量下限為0.1ppb
4 交叉反應(yīng)率:
呋喃唑酮代謝物:100% 呋喃它酮代謝物:<0.1% 呋喃妥因代謝物:<0.1% 呋喃西林代謝物:<0.1%
5 樣本回收率:
組織、肝臟: 80±25% 蜂蜜、牛奶、腸衣:75±15%
五、呋喃唑酮快速檢測(cè)試劑盒組成
酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)液(6個(gè))、高標(biāo)準(zhǔn)液、酶標(biāo)記物、抗體工作液、底物液A、底物液B、終止液、濃縮洗滌液、復(fù)溶液
六、貯藏條件及保存期
儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。
樣本前處理
1 樣本處理前須知:
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2 配液:
配液1:0.36M亞硝基鐵氰化鈉溶液(牛奶、奶粉樣本)
10.7g亞硝基鐵氰化鈉加去離子水混勻溶解,定容至100ml。
配液2:1.04M硫酸鋅溶液(牛奶、奶粉樣本)
29.8g硫酸鋅加去離子水混勻溶解,定容至100ml。
配液3:0.1M K2HPO4 溶液
稱11.4g K2HPO4?3H2O加去離子水混勻溶解,定容至500ml。
配液4:1M HCL
8.6mL濃HCL加去離子水混勻,定容至100mL。
配液5:1M NaOH溶液
稱取4g NaOH,加去離子水混勻溶解,定容至100ml。
配液6:復(fù)溶液
將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋(1份復(fù)溶液加1份去離子水),用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。
配液7:工作洗滌液
將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。
樣本前處理步驟:
1 牛奶樣本處理方法
1)取5ml樣本于離心管中,加250ul 亞硝基鐵氰化鈉溶液(配液1)振蕩混合30秒,加250ul 硫酸鋅溶液(配液2)振蕩混合30秒,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
2)取上清1.1ml,加4ml去離子水、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑,振蕩5分鐘;
3)在37℃過夜孵育(約16小時(shí))或50℃(超過50℃時(shí)會(huì)影響分層效果)水浴孵育3小時(shí);
4)分別加入5ml 0.1M K2HPO4 溶液,0.4ml 1M NaOH溶液和5ml的乙酸乙酯,振蕩5分鐘;
5)室溫下4000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘;
6)取出2.5ml的上層液到另一個(gè)離心管中,50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/p>
7)用1ml正已烷溶解殘留物,加入1ml復(fù)溶工作液充分振蕩混合30秒;室溫4000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘;
8)去除上層正已烷,取50μl下層液用于分析。