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一、豬乙腦病毒抗體ELISA檢測試劑盒
通用名:豬乙型腦炎病毒IgG抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine Japanese encephalitis virus (ELISA)
二、包裝規格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒
三、預期用途 日本乙型腦炎又名流行性乙型腦炎是由日本乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的一種急性人獸共患傳染病。可引起豬乙型腦炎,主要特征為高熱、流產、死胎和公豬睪丸炎。
豬乙型腦炎病毒抗體檢測試劑盒用于檢測豬血清、血漿中豬乙型腦炎病毒抗體,可用于豬乙型腦炎病毒疫苗免疫效果評價。
四、豬乙腦病毒抗體ELISA檢測試劑盒原理
豬乙型腦炎病毒抗體檢測試劑盒系由預包被豬乙型腦炎病毒重組E2蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬乙型腦炎病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經溫育后若樣品中含有豬乙型腦炎病毒抗體,則將與酶標板上抗原結合,經洗滌除去未結合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產物變為黃色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬乙型腦炎病毒抗體。
五、試劑盒組成
酶標板、酶標記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照
六、儲存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期為12個月。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個月。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條,設陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應30分鐘。
5.甩去孔內液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值,。
【參考值】 實驗正常的情況下,陰性對照的平均OD值即ODNC應≤0.3,陽性對照的平均OD值即ODPC應≥0.6。
【檢驗結果的判定】
1.樣品的OD值即ODS;
2.閾值計算:SP值=(ODS-ODNC)/(ODPC-ODNC);
SP值≥0.2,結果判定為陽性;SP值<0.2,結果判定為陰性。
3.本實驗結果為陰性時表明豬只抗體水平不足,建議補打相應疫苗。