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一、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體檢測(cè)試劑盒
通用名:豬圓環(huán)病毒Ⅱ型IgG抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Porcinecircovirus (ELISA)
二、包裝規(guī)格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒
三、預(yù)期用途 用于檢測(cè)豬血清中豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(Porcinecircovirus,PCV2)抗體。評(píng)估豬場(chǎng)豬圓環(huán)苗免疫狀況,感染豬的血清學(xué)診斷。
四、試劑盒原理
檢測(cè)試劑盒系由預(yù)包被豬圓環(huán)病毒Ⅱ型重組cap蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)豬血清、血漿樣本中豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體。
五、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體檢測(cè)試劑盒組成
酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照
六、儲(chǔ)存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期為12個(gè)月。
包被板開封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應(yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陰性對(duì)照的平均OD值即ODNC應(yīng)≤0.3,陽(yáng)性對(duì)照的平均OD值即ODPC應(yīng)≥0.6。
【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】
1.樣品的OD值即ODS;
2.閾值計(jì)算:SP值=(ODS-ODNC)/(ODPC-ODNC);
SP值≥0.2,結(jié)果判定為陽(yáng)性;SP值<0.2,結(jié)果判定為陰性。
3.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明豬只抗體水平不足,建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)豬血清、血漿中豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體,根據(jù)SP值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。