目錄:上海晨曄生物科技有限公司>>技術服務>>細胞生物學>> CHIP
CHIP
染色質免疫沉淀(CHIP)是一種用于表觀遺傳學研究的技術,可以快速反映蛋白質-DNA相互作用。
概念:染色質免疫沉淀法(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是一種基于抗原抗體反應的特異性,從而起到選擇性地使DNA結合蛋白及其DNA靶標富集的作用,是在全基因組水平研究生命體組織或細胞內蛋白質與DNA相互作用的一種技術方法。
實驗原理
首先在活細胞狀態下固定蛋白質-DNA復合物,并將其隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小片段,然后利用抗原抗體反應的特異性,特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段,通過對目的片段的純化與檢測分析,獲得蛋白質與DNA相互作用的信息,可以真實地反映體內蛋白因子與基因組DNA結合的狀況。ChIP可用來研究某種特殊的蛋白-DNA相互作用、多種蛋白-DNA相互作用或全基因組或部分基因內的相互作用。
實驗步驟
細胞固定
甲醛交聯
染色質斷裂
超聲
免疫沉淀蛋白
和DNA復合物
用Protein-A/G Sephrose回收免疫沉淀
沉淀收集,洗滌,
解交聯
蛋白酶K/NaCl處理,接觸交聯
DNA純化
鑒定