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什么是賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀?

2024-11-25  閱讀(61)

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什么是賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀?

賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀(Thermo Fisher Scientific 7500 Real-Time PCR System)是一款經典的實時熒光定量 PCR 儀器,廣泛應用于基因表達分析、病原體檢測、突變篩查、基因分型和藥物研發等領域。7500 系列 PCR 儀通過實時監測擴增過程中的熒光信號,精確定量目標核酸的濃度,是分子生物學研究和臨床診斷的核心工具之一。


1. 產品簡介

賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀以其高靈敏度、高特異性和強大的數據分析能力而受到科研人員的青睞。它支持多種實驗類型,包括相對定量、絕對定量、突變分析和熔解曲線檢測,能夠滿足從基礎科研到臨床診斷的多種需求。

主要特點

  1. 實時檢測:實時監控熒光信號,精確定量目標核酸。

  2. 多通道檢測:支持多色熒光通道,用于多重實驗設計。

  3. 快速模式:部分型號支持快速運行模式,將實驗時間縮短至30分鐘。

  4. 靈活性強:支持多種熒光染料和探針技術,包括 TaqMan 探針和 SYBR Green。

  5. 數據處理能力強:內置軟件提供全面的 Ct 值分析、標準曲線繪制和結果輸出功能。


2. 技術規格

(1) 光學系統

  • 支持多色熒光檢測,標準配置包括 5 個熒光通道:

    • FAM、SYBR Green、VIC、HEX、ROX 等染料。

  • 靈敏度高,能夠精確檢測低豐度核酸。

(2) 溫控模塊

  • 溫度范圍:4℃ 至 100℃,適應各種實驗需求。

  • 溫度均勻性:±0.5℃,確保所有樣品反應一致。

(3) 運行模式

  • 標準模式:適合所有常規實驗。

  • 快速模式:優化熱循環流程,將實驗時間縮短至 30 分鐘。

(4) 反應板支持

  • 96 孔光學反應板,適合中等通量實驗室。

(5) 數據采集與分析

  • 實時采集熒光信號,生成擴增曲線、熔解曲線和標準曲線。

  • 數據精確可靠,支持相對定量、絕對定量和基因分型分析。


3. 核心技術與功能

(1) 實時熒光檢測

  • 在 PCR 擴增的每個循環中實時檢測熒光信號,監控目標核酸的累積量。

  • 熒光信號與目標核酸的初始濃度呈正比,支持精確定量分析。

(2) 熒光檢測方法

  1. SYBR Green 染料法

    • 熒光染料嵌入雙鏈 DNA,發出熒光信號。

    • 優點:實驗簡單,成本低。

    • 缺點:可能受到非特異性擴增干擾。

  2. TaqMan 探針法

    • 探針通過熒光基團和猝滅基團的分離發出熒光信號。

    • 優點:特異性高,結果更可靠。

    • 缺點:探針設計和合成成本較高。

(3) 高分辨率熔解曲線分析

  • 熔解曲線分析用于驗證擴增特異性,單一峰值表明擴增產物特異性好。

(4) 快速模式

  • 通過優化熱循環程序,7500 系列的快速模式可在 30 分鐘內完成實驗,極大提高了實驗室的工作效率。

(5) 智能化數據分析

  • 軟件自動生成 Ct 值和標準曲線,并可導出擴增曲線和熔解曲線等實驗數據。


4. 工作流程

(1) 樣品準備

  1. 核酸提取:從樣品中提取 DNA 或 RNA,確保純度和濃度符合實驗要求。

  2. 逆轉錄(針對 RNA 樣本):將 RNA 轉錄為 cDNA。

(2) 配置 PCR 反應體系

  • 配制 PCR 反應液,包括:核酸模板、引物、熒光染料或探針、dNTP、緩沖液和 Taq DNA 聚合酶。

  • 按規定體積分裝到 96 孔反應板中,并密封。

(3) 設置實驗參數

  1. 在軟件中選擇實驗類型(如相對定量、絕對定量或基因分型)。

  2. 設置熒光通道和樣品信息(樣品名稱、分組等)。

  3. 輸入熱循環程序,包括變性、退火和延伸階段的溫度和時間。

(4) 運行實驗

  • 將反應板放入儀器樣品艙,啟動實驗。

  • 實驗運行時,實時采集熒光信號,生成擴增曲線。

(5) 數據分析

  • 實驗完成后,使用軟件分析 Ct 值、標準曲線、熔解曲線等數據。

  • 輸出實驗報告或導出數據文件。


5. 應用領域

(1) 基因表達分析

  • 通過實時檢測基因的表達水平,用于研究基因調控機制和疾病標志物。

(2) 病原體檢測

  • 快速檢測病毒和細菌 DNA 或 RNA,用于傳染病診斷(如檢測)。

(3) 突變篩查

  • 檢測基因突變和多態性(SNP),廣泛應用于遺傳性疾病研究和癌癥診斷。

(4) 藥物研發

  • 測量特定基因在藥物處理下的表達變化,用于篩選藥物靶點。

(5) 食品與環境安全

  • 檢測食品中的病原體或轉基因成分,監測環境樣本中的污染物。


6. 優勢與特點

  1. 高靈敏度與高特異性

  • 光學系統靈敏度高,能夠檢測低豐度核酸模板。

  • TaqMan 探針法確保實驗結果的特異性。

  1. 快速運行

  • 快速模式縮短實驗時間,提高實驗室效率。

  1. 易用性

  • 用戶界面友好,支持一鍵設置和自動化數據分析。

  1. 靈活性

  • 兼容多種熒光染料、探針和實驗類型,適合多樣化實驗需求。

  1. 可靠性

  • 數據穩定性高,結果重復性好,適合科研和臨床應用。


7. 注意事項

  1. 樣品準備:確保核酸提取的純度和濃度符合實驗要求,避免抑制劑干擾 PCR 反應。

  2. 試劑質量:使用新鮮的 PCR 試劑,避免試劑降解導致實驗失敗。

  3. 反應板密封:確保光學反應板密封良好,防止蒸發或氣泡干擾熒光檢測。

  4. 定期維護:清潔光學窗口,校準溫控模塊,確保儀器性能穩定。


8. 總結

賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀以其強大的檢測能力和高效的數據分析功能,為分子生物學研究和臨床應用提供了可靠的解決方案。無論是基因表達分析、病原體檢測還是藥物研發,7500 系列都能滿足實驗室的多種需求。其快速模式、靈活性和高靈敏度,使其成為科研和診斷領域中廣泛應用的經典 PCR 儀器之一。


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