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食品中氯丙醇含量測定的整體解決方案—— GB 5009.191-2024 第一篇
氯丙醇污染是近年來國際上出現的食品安全熱點問題之一，食品中檢出量較高的是3-氯丙醇，嬰幼兒配方奶粉中也常有報道檢出。3-MCPD可損害腎臟和生殖系統等，國際癌癥研究機構(International Agency for Research on Cancer，IARC)將游離態3-MCPD列入2B類致癌物清單。
安譜實驗參照國標《GB 5009.191-2024 食品安全國家標準 食品中氯丙醇及其脂肪酸乙酯、縮水甘油酯的測定》第一篇，使用CNWBOND大孔硅藻土SPE玻璃小柱，對奶粉樣品中氯丙醇進行了檢測，同位素內標法進行定量，方法本底低，回收率高，精密度好。
1、標準溶液配制
4種氯丙醇及其內標的信息見表1：
表1 目標物信息
氯丙醇混合標準中間溶液（10 μg/mL）：取0.1 mL 1000 ppm 4種氯丙醇混標溶液（貨號：CDAA-M-200252-FD-1.2ml），用正己烷溶劑定容至10 mL。于-20 ℃下保存，保存期為 6個月。
氯丙醇混合標準工作溶液（1 μg/mL）：取1 mL 10ppm 4種氯丙醇混標，用正己烷溶劑定容至10mL。臨用現配。
氘代氯丙醇混合標準工作液（10 μg/mL）：取1mL 100 ppm 4種氯丙醇內標混標溶液（貨號：CDAA-M-200271-FA-1.2ml），正己烷定容至10 mL。得到4種氘代氯丙醇混合標準工作液。于-20 ℃下保存，保存期為 6個月。
按照表2進行標準曲線的配制，臨用現配。
表2 氯丙醇標準曲線配制
2、前處理步驟
樣品前處理：
基質樣品：嬰幼兒配方奶粉。
提取：
稱取試樣4 g（精確到0.01 g）于50 mL塑料離心管中，準確加入混合內標工作液（10.0 μg/mL）20 μL，加入8 mL 20%氯化鈉溶液，渦旋1 min后，超聲10 min，于4 ℃下以10 000 r/min的轉速離心10 min，扎破上層薄膜后小心取出上清液于玻璃試管中，再加入8 mL 20%氯化鈉溶液重復提取操作1次，合并上清液，取8 mL待凈化。
凈化：
將待凈化液轉移至玻璃硅藻土小柱中，待樣品全部浸潤于填料中，放置10 min。用10 mL正己烷淋洗，棄去淋洗液，然后用15 mL乙酸乙酯洗脫，玻璃試管收集洗脫液。在洗脫液中加入5 g無水硫酸鈉，不斷振搖脫水，放置不少于30 min后過濾，轉移濾液至密閉性良好的帶蓋玻璃管中，于40 ℃下氮吹濃縮至0.5 mL（切忌濃縮至干），加入2.00 mL正己烷，渦旋混合，待衍生化。
衍生化：
于標準系列溶液和上述凈化液中用氣密針快速加入0.05 mL七氟丁酰基咪唑，立即密封，渦旋混合30 s，放置烘箱中，于70 ℃下保溫20 min。衍生結束后，取出冷卻至室溫，加入2 mL 20%氯化鈉溶液，渦旋1 min，使水相和正己烷分層，且水相澄清。取上層正己烷相，加入約0.3 g無水硫酸鈉吸水干燥，過0.22μm 疏水PTFE濾器，將溶液轉移至進樣瓶中，供上機測定。
加標樣品：
加標水平25 μg/kg（對應上機溶液濃度50ng）：稱取樣品后，加入氯丙醇混合標準工作溶液（1μg/mL） 0.1mL，后續操作同上；
加標水平200 μg/kg（對應上機溶液濃度400ng）：稱取樣品后，加入氯丙醇混合標準中間溶液（10μg/mL） 0.08mL，后續操作同上；
前處理注意事項：
1、前處理過程中盡量避免試樣塑料耗材，可使用玻璃巴斯德吸管、玻璃移液管、手動進樣針等耗材，建議進行方法空白實驗監控過程本底情況；
2、硅藻土小柱使用時，待凈化液應全部浸沒在填料上，而不能穿透，底部最好有少量的填料保持干燥，本實驗參照標準要求取8mL提取液進行過柱凈化，可滿足實驗需求，但如儀器靈敏度較好，在滿足標準的前提下，建議可以取4mL提取液進行過柱，以保證更好的凈化效果；
3、本方法為同位素內標法進行定量，氘代氯丙醇能夠對氯丙醇的回收情況進行校正，氯丙醇外標的絕對回收率可能會因為不同基質導致相對較差，如需提高絕對回收率可增加乙酸乙酯的洗脫體積至25mL；
4、七氟丁酰基咪唑易吸水，建議低溫干燥保存（可放于含有干燥劑的袋子中然后置于冰箱保存），建議臨用前從冰箱拿出；
5、衍生反應需在密閉性良好的帶蓋玻璃管中進行，建議使用頂空瓶進行；
6、尼龍濾器容易檢出本底，建議使用疏水性PTFE針式濾器進行過濾。
3、儀器條件
氣相色譜-質譜聯用儀
色譜柱：毛細管氣相色譜柱CD-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）
進樣量：2 μL
進樣口溫度：250℃，不分流進樣
載氣：氦氣，
色譜柱流速：1.0 mL/min
升溫程序：初始溫度50 ℃保持1 min，2 ℃/min升至90 ℃，以20 ℃/min升至300 ℃保持5 min。
傳輸線溫度：280℃ 離子源溫度：280℃
離子化能量：70 eV 溶劑延遲時間：5 min
掃描模式：選擇離子監測SIM模式，離子對信息見表3。
表3 目標物離子對信息
4、實驗譜圖
圖1 氯丙醇標準溶液譜圖（400 ng 標線第5點 STD-5）
圖2 樣品空白和樣品加標的TIC譜圖
（下圖為樣品空白，上圖為樣品加標200 μg/kg）
5、實驗數據
5.1 標準曲線數據
以標準品與內標的質量為橫坐標，目標物與其對應內標的峰面積比為縱坐標，繪制標準曲線。4種氯丙醇化合物的標準曲線和線性相關系數見下表。
表4 3-MCPD、2-MCPD、1,3-DCP、2,3-DCP標準曲線
5.2 加標回收率數據
嬰幼兒配方奶粉樣品的加標回收率數據見下表。
表5 奶粉基質的加標回收率數據（n=3）
6、實驗結論
使用安譜實驗標準品和相關耗材，參照國標《GB 5009.191-2024 食品安全國家標準 食品中氯丙醇及其脂肪酸乙酯、縮水甘油酯的測定》第一篇，對于嬰幼兒配方奶粉樣品中1,3-二氯-２-丙醇、2,3-二氯-1-丙醇、2-氯-1,3-丙二醇和3 -氯 -1,2-丙二醇進行檢測，加標回收率在80%-110%以上，RSD均小于5%，該方法操作簡便穩定。安譜實驗標準品和相關耗材能夠很好的滿足奶粉基質中氯丙醇含量的檢測。
7、實驗中所用到的耗材
