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　　一、客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；

　　收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。

　　二、如為貼壁細胞，請在顯微鏡下觀察細胞密度：

　　1. 未超過80%匯合度時，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水，噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作；然后打開蓋子，先把培養(yǎng)基吸出10ml左右，放在離心管里，然后瓶口過火（嚴禁直接傾倒），這樣可以保證不污染，再用10ml的移液管，將剩余的培液全部吸出，放于離心管中，培養(yǎng)瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培養(yǎng)16hr(時間根據(jù)細胞生長情況調整）之后，傳代或者凍存。

　　2. 超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

　　1) 棄去培養(yǎng)液，用3ml PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次；

　　2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于T25培養(yǎng)瓶中，倒轉放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細胞隨即脫落下來；

　　3) 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中，按要求分瓶。

　　三、如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉/分鐘離心5分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。

　　注意：換液時一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細胞不適應而造成生長不好。

　　四、細胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

　　（1）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；

　　（2）凍存的細胞復蘇后，絕大多數(shù)細胞未存活，重發(fā)；

　　（3）存活的細胞靜置24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，重發(fā)；

　　（4）凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

　　（5）視具體情況而定。　

　　細胞培養(yǎng)技術3個原則：1、用自己的一套試劑，不要和別人混用；2、勤觀察細胞，像養(yǎng)寵物一樣喜愛和關心；3、有規(guī)律地換液和傳代，不要“三天打魚，兩天曬網(wǎng)”。凍存細胞時間為5-7個工作日，活細胞為7-15個工作日。

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