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人低氧誘導因子1α試劑盒
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更新時間:2024-12-11 21:00:06

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  一、客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;

  收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。

  二、如為貼壁細胞,請在顯微鏡下觀察細胞密度:

  1. 未超過80%匯合度時,用75%酒精(建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水,噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴格無菌操作;然后打開蓋子,先把培養(yǎng)基吸出10ml左右,放在離心管里,然后瓶口過火(嚴禁直接傾倒),這樣可以保證不污染,再用10ml的移液管,將剩余的培液全部吸出,放于離心管中,培養(yǎng)瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培養(yǎng)16hr(時間根據(jù)細胞生長情況調(diào)整)之后,傳代或者凍存。

  2. 超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:

  1) 棄去培養(yǎng)液,用3ml PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次;

  2) 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于T25培養(yǎng)瓶中,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,細胞隨即脫落下來;

  3) 加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中,按要求分瓶。

  三、如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。

  注意:換液時一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,以免細胞不適應(yīng)而造成生長不好。

  四、細胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標準是什么?

 ?。?)細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、破損、漏液等,重發(fā);

  (2)凍存的細胞復蘇后,絕大多數(shù)細胞未存活,重發(fā);

 ?。?)存活的細胞靜置24小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,重發(fā);

 ?。?)凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);

  (5)視具體情況而定?!?/p>

    細胞培養(yǎng)技術(shù)3個原則:1、用自己的一套試劑,不要和別人混用;2、勤觀察細胞,像養(yǎng)寵物一樣喜愛和關(guān)心;3、有規(guī)律地換液和傳代,不要“三天打魚,兩天曬網(wǎng)”。凍存細胞時間為5-7個工作日,活細胞為7-15個工作日。

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