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二惡英檢測方法比較（一）
二惡英化合物（簡稱二惡英）是劇毒有機污染物。人體長期低劑量接觸，會導致癌癥、雌性化、胎兒畸形、糖尿病等疾病。自比利時發生二惡英食品污染事件和《POPs公約》在瑞典斯德哥爾摩簽署以來，二惡英檢測與污染防治在上受到越來越廣泛的關注[1]。二惡英檢測屬超痕量、多組分檢測，對特異性、選擇性和靈敏度要求*，被認為是當代化學分析領域的一大難點。
美國較早開展二惡英檢測研究，現已制定出一系列的檢測標準。歐洲和日本也相繼研究和制定了二惡英檢測標準方法。我國目前正處于二惡英基礎研究的起步階段，尚未提出相關檢測標準和方法，因此亟待建立符合我國國情的二惡英檢測方法和體系。
2 二惡英檢測方法
2.1化學儀器分析方法
在200余種異構體中分離出17種有明顯毒性的二惡英 ，分別測定其濃度或含量。將濃度或含量乘以每種二惡英的毒性因子（TEF）就可以得到總毒性當量（TEQ）。該方法的一般程序包括采樣、提取、凈化、定性定量。
2.1.1 采樣
樣品的取樣量由樣品類型、污染水平和方法的檢測限而定。各國對采樣程序都單獨編制了標準方法。
2.1.2 提取
為了測定提取凈化效率和校正分析丟失，首先加入17種13C－PCDD/Fs采樣內標和37Cl－2,3,7,8－TCDD凈化內標。溶劑選擇和提取步驟取決于樣品類型和凈化方法，如在處理廢棄物焚燒飛灰時溶劑選取石油醚/甲苯/二氯甲苯，在處理脂肪樣品時溶劑選取二氯甲烷/己烷。提取步驟一般包括溶解、振蕩、混勻和萃取。索氏萃取是傳統的提取方法，廣泛應用于檢測飛灰、魚、牛乳和脂肪組織樣品中的二惡英。目前，超臨界流體萃取裝置（SFE）、加壓加熱型的高速溶劑萃取裝置（ASE）和微波萃取方法也用于提取樣品中的二惡英，并有大量對比實驗證明了這些方法的有效性[3,4]。
2.1.3 凈化
為了除去大量干擾物質，目前大多采用色譜法進行凈化。色譜法通常將分配處理柱和色譜柱串聯使用，包括酸或堿處理、硅膠柱、氧化鋁柱、佛羅里柱和活性炭柱的二次凈化，具體操作因樣品類型和基質性質而異。目前，一些實驗室正在開發一次性多層柱（如微型氧化鋁柱）和HPLC凈化方法來簡化凈化過程。凈化后要加入15種13C－PCDD/Fs定量內標和2個13C標記的用于確定色譜保留時間的內標[5]。
2.1.4 定性定量
通常定性檢測采用2類不同極性的色譜柱。首先用非極性或弱極性固定相將氯原子取代數相同的二惡英化合物分為1組，然后用極性固定相分離其中的異構體，zui后通過對17 種標記的和未標記的標準樣品實施比較，獲取保留時間。定量檢測主要采用選擇離子監測技術（SIM），以13C穩定同位素為內標，根據測量目的用質量校正程序校正質譜模式、分辨率（M/∆M=10,000以上，10％谷峰）等，并儲存質量校正結果。對氯不同取代程度的異構體分別定量。儀器可選擇高分辨質譜儀（HRMS）、四級桿低分辨質譜儀（LRMS）。
2.2 生物學檢測方法
目前建立的生物學檢測方法均是通過對 Ah受體活化程度的測定來間接表達二惡英的TEQ。
2.2.1 EROD細胞培養法
二惡英與Ah受體結合活化后，被Ah受體核轉位因子（ARNT）轉移到細胞核內，活化的核內基因是特異性DNA片段即二惡英響應因子（DRE）。啟動發揮毒性的基因并增加其轉錄，從而激活EROD酶的活性。所以通過測定EROD酶的活性，可以了解二惡英激活Ah受體的能力，進而獲得測試樣品中二惡英的 TEQ[6]。
2.2.2 螢光素酶方法
該方法是將螢火蟲螢光素酶作為報告基因結合到控制轉錄的DRE上，制備成質粒載體并轉染H4IIE大白鼠肝癌細胞系（含Ah受體傳導途徑的各個部件）。以此構成的CALUX系統螢光素酶誘導活性與二惡英 的毒性系數相對應，zui終測定的結果也是TEQ[6]。
2.2.3 EIA酶免疫方法
該方法是根據鼠單克隆抗體DD3與二惡英結合的特點而建立的競爭抑制酶免疫方法。使用酶競爭配合物（HRP）和樣品中二惡英共同競爭有限的DD3抗體的特異性結合位點,以一系列不同濃度的 2,3,7,8－TCDD為標準物質，作出2,3,7,8-TCDD標樣與對應樣品的劑量－效應曲線，樣品中二惡英毒性強度以計算出的TCDD毒性等價濃度間接表示。zui終通過測定DD3與HRP螯合物的熒光強度來獲取二惡英的TEQ。螯合物的熒光強度與二惡英的TEQ成反比[7]。
2.2.4 DELFIA熒光免疫法
DELFIA（Dissociation-enhancement Lanthanide Fluoro Immunoassay）法屬于時間分辨熒光免疫分析法。該方法利用生物基因技術選擇出合適的抗原鍵合銪離子與樣品中二惡英競爭單克隆抗體，待免疫反應*后加入熒光增強液,使銪離子從抗原中解離下來，進入增強液,形成膠束，地發出熒光。螯合物zui終用時間分辨熒光法分析，其熒光強度與二惡英的TEQ成反比[8]。