前言：
碘醚柳胺是鹵化水楊酰苯胺類殺吸蟲藥，可以抑制蟲體線粒體的磷酸化過程，從而阻止蟲體內三磷酸腺甙（ATP）的合成，導致蟲體能量代謝的活力迅速減弱而死亡，隨著國內驅蟲藥的廣泛應用和研究，發現碘醚柳胺有明顯胚胎毒性，食用含有碘醚柳胺的動物性食品會影響身體健康。
本文參照《動物性食品中碘醚柳胺殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法（征求意見稿）》，利用EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號：PZ12802）凈化樣液，再通過高效液相色譜串聯質譜儀進行檢測，建立了一種對牛奶中碘醚柳胺殘留量進行分析的方法。
關鍵詞：
牛奶，碘醚柳胺，固相萃取
1 實驗過程
1.1儀器與試劑
MPREP-SPE08手動固相萃取裝置，貨號：PZ0008，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；
E.T.氮吹濃縮儀，貨號：C020017，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；
4500質譜系統，SCIEX公司；
EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號：PZ12802），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；
冷凍離心機，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學儀器廠 ；
甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；
乙腈（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；
甲酸、氨水、三乙胺等化學品均為分析純或以上規格，購自國藥集團化學試劑有限公司。
1.2 工作液配制
碘醚柳胺標準物質：100mg/瓶，購自壇墨質檢標準物質中心。
碘醚柳胺標準儲備液：取碘醚柳胺標準品適量（相當于有效成分約10mg），精密稱取，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為1000μg/mL的碘醚柳胺標準儲備液。
碘醚柳胺標準中間液：移取碘醚柳胺標準儲備液0.1mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為10μg/mL的碘醚柳胺標準中間液。
碘醚柳胺標準使用液：碘醚柳胺標準中間液0.1mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為0.1μg/mL的碘醚柳胺標準使用液。
依次移取0.1μg/mL的碘醚柳胺標準使用液0.02、0.1、0.5、2.0、5.0mL，分別置于10mL容量瓶中用甲醇定容至刻度，得到濃度依次為0.2μg/L、1μg/L、5μg/L、20μg/L、50μg/L的標準系列工作液。
1.3 實驗部分
1.3.1 樣品制備
取牛奶試樣2g，置于50 mL聚丙烯離心管中，加10.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液超聲提取10 min，8000 r/min離心5 min，收集上清液至另一50 mL離心管中，向殘渣中加入8.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液，重復提取一次，合并兩次上清液，用乙腈定容至20 mL，混勻，待凈化。
1.3.2 固相萃取凈化
EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號：PZ12802）用5mL乙腈進行活化，取1.3.1待凈化液5.0 mL上樣，上樣結束后用5mL乙腈淋洗萃取柱，再用5mL 5%甲酸乙腈洗脫萃取柱，收集洗脫液，使用E.T.氮吹濃縮儀在45℃下氮氣濃縮至近干，加2.0 mL甲醇渦旋混勻，過微孔濾膜后供LC-MS/MS測定。
1.3.3 LC-MS/MS儀器條件
色譜柱：Kinetex Luna PFP（2.6μm，3*100mm）
檢測方式：多反應監測（MRM）；
流動相：A:0.1%氨水水溶液 B: 甲醇
流速：0.3mL/min
進樣量：5μL
表1流動相梯度洗脫表
時間/min | 流動相A/% | 流動相B/% |
0 | 70 | 30 |
5 | 0 | 100 |
8 | 0 | 100 |
8.1 | 70 | 30 |
10 | 70 | 30 |
2 實驗結果
圖1 標液色譜圖
圖2 碘醚柳胺標準曲線
3 結論
本實驗使用EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號：PZ12802）對牛奶中碘醚柳胺進行凈化，通過高效液相色譜串聯質譜儀進行測定，該方法的加標回收率范圍89.6%~95.3%，RSD為2.3%，能夠滿足標準要求。也說明EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號：PZ12802）能很好的完成方法中的凈化工作，結果穩定、可靠。
參考文獻
[1] 《動物性食品中碘醚柳胺殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法（征求意見稿）》
表 2 加標回收率
加標濃度μg/kg | 回收率（%） | 平均值 | RSD | |||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | % | % | |
20 | 91.6 | 91.0 | 89.9 | 89.6 | 90.6 | 95.3 | 91.3 | 2.3 |
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