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1原理：TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感復合物，1894年*合成用來檢測種子的生存能力，1958年開始用來染色檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。它是呼吸鏈中吡啶—核苷結構酶系統的質子受體，與正常組織中的脫氫酶反應而呈紅色，而缺血組織內脫氫酶活性下降，不能反應，故不會產生變化呈蒼白。
2 取腦：可麻醉后直接取腦或經生理鹽水灌注后取腦。因為腦組織未用多聚甲醛固定，所以較軟，取腦時更應仔細，保持大腦的完整性。
3 －20度冰箱中速凍20分鐘左右，便于切片。
4 切片：一般切成5－6片，每隔2mm切一片。第*刀在腦前極與視交叉連線中點處；第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。（參考：張均田，主編.現代藥理試驗方法）。如果需計算面積的話，應切得均勻或用專門的腦槽。
5將切片置于TTC中，常規濃度為2%，也有用1%或更低濃度的。
6用錫箔紙蓋住后，放入37C溫箱15～30min，不時翻動腦片，使均勻接觸到染色液。也可以用將腦片放入多孔板，再滴入TTC，覆以圓形蓋玻片使均勻染色。
7 染色后效果：為皮層下梗死。