實驗室透析常見問題解答（一）

Q1：如何準備透析膜管？

透析膜管的準備因膜管材質(zhì)和生產(chǎn)工藝的差別而有所不同。注意，我們不推薦煮沸處理，因其可能損壞膜管并改變膜孔徑。

1. 即用型RC膜，CE膜可以用DI水沖洗15-30分鐘，去除防腐劑處理液。
2. Spectra/PorR7 標準級RC膜已經(jīng)預處理，去除了重金屬和硫化物，只需在去離子水中浸泡15-30分鐘，去除*即可。
3. Spectra/PorR 1-6 標準級RC膜，一般情況下，在水中漂洗足以去除甘油或防腐劑，而對于親和研究之類極其敏感的透析應用或者重金屬及硫化物會影響透析樣品下游分析的應用，可能需要一些額外的處理以去除在生產(chǎn)過程中引入的痕量水平重金屬及硫化物，spectrumlabs提供兩種膜預處理溶液：及，具體產(chǎn)品信息請參考“”網(wǎng)頁說明。

Q2：透析的原理是什么？一般需要多長時間才能完成？

透析是指溶質(zhì)在濃度梯度的驅(qū)使下，選擇性擴散通過半透膜，從而達到大/小分子分離，膜兩側(cè)濃度平衡，即小顆粒的溶質(zhì)通過膜，而大分子物質(zhì)不能通過，被截留在膜另一邊。

如果將樣品置于透析膜管內(nèi)，通過置換膜管外部的透析緩沖液，可將小顆粒物質(zhì)清除，從而達到純化大分子物質(zhì)的目的。一般來說，一天之內(nèi)置換3-5次緩沖液，然后在室溫條件下，放在攪拌臺上隔夜透析，即可達到的透析結果。標準的透析操作一般需要16-24小時。許多因素會影響透析效率，包括：擴散系數(shù)、pH值、溫度、時間、物質(zhì)濃度、樣品體積、透析緩沖液體積、透析緩沖液的置換次數(shù)、膜表面積、膜厚度、分子帶電荷及緩沖液攪拌速率。

Q3：透析一個樣品需要多少體積的透析緩沖液？緩沖液置換頻率怎么安排？

透析緩沖液的體積越大，小分子擴散的驅(qū)動力越大。我們一般推薦緩沖液和樣品的體積比為100:1。當擴散速率降低，膜兩側(cè)溶液趨于平衡時，通過置換緩沖液，可維持小分子擴散驅(qū)動力和透析速率。我們一般推薦在12-24小時內(nèi)，置換緩沖液2到3次，具體安排如下：

*次緩沖液置換：透析開始后2-3小時

第二次緩沖液置換：透析開始后4-5小時

zui后一次緩沖液置換：透析隔夜之前

Q4：如何選擇正確的截留分子量（MWCO）？

截留分子量應該竟可能的大，以使透析速率zui大化。但是，為了獲得zui大的樣品回收率，選擇的截留分子量應至少為需純化的大分子物質(zhì)分子量的一半。對于需對幾種分子進行分離的應用，分子之間的分子量差至少為5倍，才能完成有效的膜透析。若不能滿足分子量差的要求，可能需要使用其它的分離技術，如色譜方法或切向流過濾。

Q5：哪種膜的蛋白質(zhì)結合率zui低？

每種膜對不同的分子具有不同的親和性。對于球狀蛋白，相對的結合親和性由低到高為CE< RC

Q6：怎樣為膜管選擇合適大小的膜夾？

標準RC膜（Spectra/Por 1-7）和生物技術級RC膜由柔韌的再生纖維素聚合物制造，可使用任何一種透析膜夾密封。生物技術級CE & PVDF膜由相對剛性的聚合物制造，需要使用相對溫和的通用膜夾。鑒于通用膜夾對于所有類型的膜管都能起到很好的密封作用，如不確定選擇哪種膜夾合適，使用通用膜夾即可。標準膜夾一般只用于標準級RC膜管。

膜夾的密封寬度一般需比膜管的扁平寬度長4-10 mm。通用膜夾的zui小密封寬度為50 mm。對于所有扁平寬度規(guī)格的膜管，均有相應的膜夾可供選擇。