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出血性大腸桿菌O157：H7檢測試劑盒說明書
廣州健侖生物科技有限公司
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（一）生化管的使用方法
本安瓿瓶已在凹頸處有割口，請以瓶子上的藍(lán)點(diǎn)為受力點(diǎn)，用手以柔力掰開（注意：如安瓿瓶上沒有藍(lán)點(diǎn)的，則用砂輪在安瓿瓶的凹頸處劃痕，然后再掰開）！本鑒定盒配套的塑料帽已滅菌。所有的安瓿瓶、吸塑架、塑料帽在使用后均高壓滅菌后方可棄去。
（二）出血性大腸桿菌O157：H7生化鑒定盒的詳細(xì)使用方法
出血性大腸桿菌O157：H7為革蘭氏陰性桿菌，需氧或兼性，有周鞭毛，并有菌毛，不產(chǎn)生芽孢的桿菌。發(fā)酵乳糖，不發(fā)酵或遲緩發(fā)酵山梨醇。氧化酶陰性。MUG陰性。從分離培養(yǎng)平板上挑取可疑菌苔接種于每種微量生化管內(nèi)。將已接種的生化管套上無菌塑料帽，直立于三折吸塑短架內(nèi)，于35－37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果觀察見表1。注意：如有特殊的接種方式或培養(yǎng)時間，請詳見每種生化管附帶的使用說明。
表1
產(chǎn)品名稱 | 結(jié)果判定 | 培養(yǎng)時間 （小時） | 使用說明 | |
陽性 | 陰性 | |||
山梨醇 | 黃色 | 紫色 | 8－24 |
|
纖維二糖 | ||||
棉子糖 | ||||
蛋白胨水 | 紅色 | 不變色 | 24 | 培養(yǎng)后加靛基質(zhì)試劑2－3滴，立即觀察結(jié)果。 |
西蒙氏枸櫞酸鹽 | 藍(lán)色 | 不變色 | 24－48 | 用接種針挑取新鮮菌苔在斜面上劃“之”字形接種，豎立培育。 |
鳥、賴氨酸脫羧酶 | 試驗管藍(lán)綠色， 對照管變黃 | 試驗管與對照管均變黃 | 18－24 | 每株被檢菌應(yīng)同時接種氨基酸對照管一支，并加滅菌液體石蠟5-8滴覆蓋培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)18－24小時，未見陽性結(jié)果，繼續(xù)培養(yǎng)4天，再做終結(jié)果判定。 |
半固體瓊脂 | 擴(kuò)散生長 | 無擴(kuò)散生長 | 24—48 | 用接種針挑取新鮮菌苔穿刺接種，豎立培育。 |
三糖鐵瓊脂 | 產(chǎn)酸變黃色， 產(chǎn)硫化氫變黑色 | 不變色 | 24 | 用接種針挑取新鮮菌苔穿刺，穿刺完畢后在斜面上劃“之”字形接種，豎立培育。 |
葡萄糖磷酸鹽胨水 | MR： 紅色 | 不變色 | 96 | 培養(yǎng)后加MR試劑2－3滴，立即觀察結(jié)果。 |
VP： 紅色 | 不變色 | 48 | 培養(yǎng)后依次加入8滴VP試劑甲液及4滴乙液，混勻，再培養(yǎng)10－20分鐘觀察結(jié)果。 | |
試驗項目 | 結(jié)果判定 |
山梨醇 | 陰性或遲緩 |
纖維二糖 | 陰性 |
棉子糖 | 陽性 |
蛋白胨水 | 陽性 |
西蒙氏枸櫞酸鹽 | 陰性 |
鳥氨酸脫羧酶 | 陽性 |
賴氨酸脫羧酶 | 陽性 |
半固體瓊脂 | 有動力或無動力 |
三糖鐵瓊脂 | 底及斜面呈黃色H2S陰性 |
葡萄糖磷酸鹽胨水 | MR 陽性 VP 陰性 |
備注：本鑒定盒是按照產(chǎn)品目錄中的品種成份從左到右的順序擺放。
（三）出血性大腸桿菌O157：H7的和生化鑒定特征（見表2）
表2 大腸桿菌O157：H7的生化特征
試驗項目 | 結(jié)果判定 |
山梨醇 | 陰性或遲緩 |
纖維二糖 | 陰性 |
棉子糖 | 陽性 |
蛋白胨水 | 陽性 |
西蒙氏枸櫞酸鹽 | 陰性 |
鳥氨酸脫羧酶 | 陽性 |
賴氨酸脫羧酶 | 陽性 |
半固體瓊脂 | 有動力或無動力 |
三糖鐵瓊脂 | 底及斜面呈黃色H2S陰性 |
葡萄糖磷酸鹽胨水 | MR 陽性 VP 陰性 |
注：“+” 陽性； “—” 陰性 ；“＋/－” 陽性或陰性
凡用于上述方法在被檢食品中分離獲得的純菌落，經(jīng)用抗E.coli O157：H7標(biāo)準(zhǔn)血清或EHEC O157：H7。乳膠凝集試劑測試，呈陽性結(jié)果即可報告為該食品試樣中檢出腸出血性大腸桿菌O157：H7。
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